分枝杆菌知识大全-仪表展览网

分枝杆菌简介

　　分枝杆菌属于含分枝菌酸类。分枝杆菌的主要特点是细胞壁含有大量脂质，主要是分枝菌酸。这和其染色性、生长特性、致病性、抵抗力等密切相关。一般不易着色，若经加温或延长染色时间而着色后能抵抗强脱色剂盐酸乙醇的脱色，故又称抗酸杆菌(acid-fast bacilli)。分枝杆菌属无鞭毛、无芽胞、不产生内、外**，其致病性和菌体成分有关。引起的**都呈慢性，并伴有肉芽肿。

分枝杆菌种类

　　分枝杆菌种类较多，可分为结核分枝杆菌复合群、非结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌三类。非结核分枝杆菌根据生长速度和产色等不同又分为4组。

　　一、结核分枝杆菌

　　结核分枝杆菌(M.tuberculosis)，俗称结核杆菌，是引起结核病的病原菌。可侵犯全身各器官，但以肺结核为*多见。结核病至今仍为重要的传染病。估计世界人口中1/3感染结核分枝杆菌。据WHO报道，每年约有800万新病例发生，至少有300万人死于该病。

　　结核分枝杆菌在体内外经青霉素、环丝氨酸或溶菌酶诱导可影响细胞壁中肽聚糖的合成，异烟肼影响分枝菌酸的合成，巨噬细胞吞噬结核分枝杆菌后溶菌酶的作用可破坏肽聚糖，均可导致其变为L型，呈颗粒状或丝状(图14-1B与C)。异烟肼影响分枝菌酸的合成，可变为抗酸染色阴性。这种形态多形染色多变在肺内外结核感染标本中常能见到。临床结核性冷脓疡和痰标本中甚至还可见有非抗酸性革兰阳性颗粒，过去称为Much颗粒。该颗粒在体内或细胞培养中能返回为抗酸性杆菌，故亦为L型。

　　二、非结核分枝杆菌

　　非结核分枝杆菌(nontuberculosis mycobacteria)是指结核分枝杆菌、牛分枝杆菌与麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌。原称为非典型分枝杆菌(atypical mycobacteria)，其特性有别于结核分枝杆菌，如对酸、碱比较敏感;对常用的抗结核菌**较耐受;生长温度不如结核分枝杆菌严格;多存在于环境中;为条件致病菌。可因引起结核样病变而受到关注。抗原与结核分枝杆菌有交叉。

　　Runyon根据菌落色素与生长速度将非结核分枝杆菌分为4组。

　　第Ⅰ组：光产色菌(photochromogen)。本组**在暗处为奶油色，曝光1小时后再培养即成橘黄色。生长缓慢，菌落光滑。对人致病的有堪萨斯分枝杆菌(M.kansas)，引起人类肺结核样病变，常有空洞形成; 海分枝杆菌(M.marinum)，在水中可通过皮肤擦伤处侵入，引起皮肤**、结节与溃疡，病理检查见有抗酸菌，易被误认为麻风分枝杆菌。

　　第Ⅱ组：暗产色菌(scotochromogen)。这类**在暗处培养时菌落呈橘红色。在37℃生长缓慢，菌落光滑。对人致病的有瘰疠分枝杆菌(M.scrofulaceum),引起儿童**结炎。

　　第Ⅲ组：不产色菌(nonphotochromogen)。通常不产生色素。40～42℃下生长慢。菌落光滑。鸟-胞内分枝杆菌(M.avium-intracellulare)可引起结核样病变，多见于肺与肾。

　　第Ⅳ组：迅速生长菌(rapid grower)。在25～45℃生长。生长快，培养5～7d即可见到菌落，菌落粗糙，有的并能产色。对人致病的有偶发分枝杆菌 (M.fortuitum)、龟分枝杆菌(M.chelonei)和溃疡分枝杆菌(M.ulcerans)，引起皮肤病。耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)不致病，但经常在外**皮脂中存在，检查粪、尿中结核分枝杆菌时应予注意。

　　非结核分枝杆菌是否有致病性可用抗煮沸试验加以区别。非致病株煮沸1min即失去抗酸性，而致病株能耐10min，甚至高压**亦不失去抗酸性。结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的鉴别，除热触酶试检外，可将菌苔置含盐水小滴的玻片上研磨，前者不易乳化而后者容易乳化。

　　三、麻风分枝杆菌

　　麻风分枝杆菌(M.laprae)，俗称麻风杆菌，引起麻风，是一种慢性传染病。流行广泛。目前全世界约有病例1200万，主要分布在亚、非和拉丁美洲。我国建国前流行较严重，估计约有50万例病人。　　麻风分枝杆菌是一种典型胞内菌，病人渗出物标本涂片中可见大量麻风分枝杆菌存在于细胞内。这种细胞的胞浆呈泡沫状，称麻风细胞。这与结核分枝杆菌区别有重要意义。

　　麻风分枝杆菌在体外人工培养至今仍未成功。有人将麻风分枝杆菌注入小鼠足垫，并将足垫温度降低，即可见麻风分枝杆菌繁殖并能传代。此法可供**筛选和**及**研究之用。

分枝杆菌微生物学检查法

　　一、麻风分枝杆菌微生物学检查法

　　主要是标本涂片染色显微镜检查。

　　显微镜检查可从患者鼻粘膜或皮损处取材，用抗酸性染色后检查。一般瘤型和界线类患者标本中可找到**在细胞内存在，有诊断意义。结核样型患者中很少找到**。欲提高检查的阳性率，也可以用金胺染色后以荧光显微镜检查。

　　麻风菌素试验(lepromin test)对诊断没有重要意义，因与结核菌有交叉反应，但可用于麻风的分型和了解预后。方法是应用麻风结节经生理盐水提取制成麻风菌素(lepromin)作皮肤试验，取0.1 ml注射于前臂皮内。反应有两种：一种为早期反应，出现于注射后3～4d，**直径5mm以上者为阳性，表明患者对麻风菌素敏感; 另一种为后期反应，出现于3～4周，表明患者对麻风有**。

　　二、结核分枝杆菌微生物学检查法

　　结核病的症状和体征往往不典型，虽可借助X线摄片诊断，但确诊仍有赖于**学检查。

　　1、标本

　　标本的选择根据感染部位。可取痰、支气管灌洗液、尿、粪、脑脊液或胸、腹水。其他肺外感染可取血或相应部位分泌液或组织细胞。

　　2、直接涂片镜检

　　标本直接涂片或集菌后涂片，用抗酸染色。若找到抗酸阳性菌即可初步诊断。抗酸染色一般用Ziehl-Neelsen法。为加强染色，可用IK(intensified Kinyoun)法染色。将石炭酸复红染色过夜，用0.5% 盐酸乙醇脱色30s，则包括大多结核分枝杆菌L型也可着色。为提高镜检敏感性，也可用金胺染色，在荧光显微镜下结核分枝杆菌呈显金黄色荧光。

　　3、浓缩集菌

　　先集菌后检查，可提高检出率。培养与动物试验也必须经集菌过程以除去杂菌。脑脊液和胸、腹水无杂菌，可直接离心沉淀集菌。痰、支气管灌洗液、尿、粪等污染标本需经4% NaOH(痰和碱的比例为1:4,尿、支气管灌洗液和碱的比例为1:1)处理15min，时间过长易使结核分枝杆菌L型与非结核分枝杆菌死亡。尿标本先加5% 鞣酸、5% 乙酸各0.5ml于锥形量筒内静置，取沉淀物处理。处理后的材料再离心沉淀。取沉淀物作涂片染色镜检。若需进一步作培养或动物接种，应先用酸中和后再离心沉淀。

　　4、分离培养

　　将经中和集菌材料接种于固体培养基，器皿口加橡皮塞于37℃培养，每周观察1次。结核分枝杆菌生长缓慢，一般需2～4周长成肉眼可见的落菌。液体培养可将集菌材料滴加于含血清的培养液，则可于1～2周在管底见有颗粒生长。取沉淀物作涂片，能快速获得结果，并可进一步作生化、药敏等测定和区分结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌。国内学者已证明结核分枝杆菌L型可存在于血细胞内或粘附于细胞表面。这种患者往往血沉加快，用低渗盐水溶血后立即接种高渗结核分枝杆菌L型培养基能提高培养阳性率。

　　5、快速诊断

　　一般涂片检查菌数需5x103～4/ml,培养需1x102/ml,标本中菌数少于此数时不易获得阳性结果，且培养需时较长。目前已将多聚酶链反应(PCR)扩增技术应用于结核分枝杆菌DNA鉴定，每ml中只需含几个**即可获得阳性，且1?2d得出结果。操作中需注意实验器材的污染问题，以免出现假阳性。又**L型由于缺壁并有代偿性细胞膜增厚，而一般常用的溶菌酶不能使细胞膜破裂释出DNA，以致造成PCR假阴性。用组织磨碎器充分研磨使细胞破裂后，则可出现阳性。目前有条件的单位使用BACTEC法，以含14C棕榈酸作碳源底物的7H12培养基，测量在**代谢过程中所产生的14C量推算出标本中是否有抗酸杆菌，5～7d就可出报告。

　　近年来国内外研究证明临床各种类型的肺结核患者中40% 左右分离出L型。经**的结核病人**型消失，L型常持续存在。有空洞患者痰中已不排**型者，8% 左右仍可检出L型。故有学者建议将多次检出L型亦作为结核病活动判断标准之一，**型与L型均转阴才能作为痰阴性。