方法摘要：

　　Venusil AA 氨基酸分析的原理为目前广泛使用的PITC(异硫氰酸苯酯)衍生法。经过简化后的衍生方法有很多优点：方便、快速;衍生物单一、稳定，-20℃可贮存数月;采用Venusil AA 柱分析时间短;结果准确;试剂、副产物、溶剂等多种干扰因素可通过快速萃取去除;紫外检测(254nm)灵敏度高。

　　样品：

　　取某品牌牛奶0.5g，按照博纳艾杰尔氨基酸分析方法包进行水解衍生，并取混合氨基酸标准溶液(准确量取氨基酸标准溶液1.0 mL，置于5mL容量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液定容至刻度)加内标正亮氨酸，然后进行衍生。(异硫氰酸苯酯为衍生剂)

　　色谱柱：Agela Venusil AA，4.6×250mm，5µm，100Å(订货号：VA952505-K)

　　流动相：A：称取15.2g无水醋酸钠，加水1850mL，溶解后用冰醋酸调pH至6.5，然后加乙腈140mL，混匀，用0.45µm滤膜过滤。

　　B：80%(V/V)乙腈溶液

　　时间       流动相A

　　0                    0

　　2                    0

　　15                 10

　　25                  30

　　33                  45

　　33.1              100

　　39                 100

　　39.1               0

　　45                  0

　　流速：1.0mL/min

　　进样体积：10μL

　　温度：40℃

　　波长：254nm

　　Agela Venusil AA HPLC法测定牛奶中羟脯氨酸混和标准品图谱 (6.50min为羟脯氨酸)

　　Agela Venusil AA HPLC法测定牛奶中羟脯氨酸图谱(6.51min为羟脯氨酸)