细胞培养常见问题及解答（一）1.如何选用培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，优选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的优选是AIM V培养基（SFM）。 2.为什么要热灭**清？ 加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活**细胞和巨噬细胞。在进行**学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭**清。
3.L－谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？ L－谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L－谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L－谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有*终确定。L－谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。
4.GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？ GlutaMAX-I二肽是L－谷氨酰胺的衍生物，将其不稳定的α－氨基用L－丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L－谷氨酰胺供利用。 GlutaMAX-I二肽非常稳定，即使在121磅**20分钟，GlutaMAX-I二肽溶液有*小的降解，如果在相同条件下，L－谷氨酰胺几乎完全降解。
5.为什么培养基中可以省去加酚红？ 酚红在培养基中被用来作为PH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类**的作用（特别是雌**）。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。
6.如何用台盼兰计数活细胞？ 用无血清培养基把细胞悬液稀释到200－2000个/毫升，在0.1毫升的细胞中加入0.1毫升的0.4％的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞。
7.如何消除组织培养的污染？ 当重要的培养污染时，研究者可能试图消除或控制污染。首先，确定污染物是**、**、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室**剂**培养器皿和超净台，检查HEPA过滤器。 高浓度的***和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性，因而，做剂量反应实验确定***和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用***如两性霉素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。1)在无***的培养基中消化、计数和稀释细胞，稀释到常规细胞传代的浓度。2)分散细胞悬液到多孔培养板中，或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内，把选择***加入到每一个孔中。例如，两性霉素B推荐下列浓度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。3)每天观测细胞毒性指标，如脱落，出现空泡，汇合度下降和变圆。4)确定***毒性水平后，使用低于毒性浓度2－3倍浓度的***的培养液培养细胞2－3代。5)在无***的培养基中培养细胞一代。6)重复步骤4。7)在无***的培养基中培养4－6代，确定污染是否以已被消除。
8.培养基中丙酮酸钠的作用是什么？ 丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源。尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。
9.Hank’s 平衡盐溶液（HBS）要在空气中使用，不需要CO2培养箱。原因是什么？Hank’s 平衡盐溶液（HBS）和Earle’s平衡盐溶液（EBS）有什么本质的功能差别？ HBS和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平，碳酸氢钠的含量在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的PH值。Eagles液在空气水平的CO2 中，溶液会变碱，Hanks液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagles液。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks液就可以了。
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