PCR/RT-PCR基本原理及常用试剂耗
PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：
①模板DNA的变性：模板DNA经加 热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；
③引物的延伸：DNA模板--引物结合 物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需 2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。到达平台期(Plateau)所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。
RT-PCR是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA，关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。
PCR反应五要素： 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
PCR/RT-PCR常用试剂与耗材：
1.DEPC 10ml sigma分装 原价：160
2.溴化乙锭EB 1g sigma分装 原价：210
3.噻唑兰MTT 250mg sigma分装 原价：210
4.二甲基亚枫DMSO 100ml sigma分装 原价：140
5.Ivitrogen脂质体2000 0.75ml Ivitrogen原装 原价：3100
6.0.2mlPCR管 1000支/袋 国产 原价：45
7.1.5ml离心管 500支/袋 国产 原价：45
8.10微升、200微升、1000微升吸头, 以上吸头都是15元/包 1000个/包 赠送吸头盒一个。
9.RT逆转录试剂盒 20T MBI原装 原价：400
10.PCR试剂盒 100T 现在只有200T包装，MBI原装 原价：460
11.100-1500bp DNA Marker 50T 北京天跟 原价：160 货号：MD109-01
12.总RNA提取Trizol 100ml Ivitrogen原装 原价：1900
13.琼脂糖100g 100g 西班牙原装 原价：460