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反相色谱填料的选择
现代高效液相色谱中,分离效果好坏的一个重要指标是反相色谱填料的选择。但是反相色谱填料的选择范围很宽,因此,要做合适的选择,必须对此有一定的认识和了解。
一、硅胶基质填料
1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)以及其他具有极性官能团胺基团,如(NH2,APS)和氰基团(CN,CPS)的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基团极性较强,因此,分离的次序是依据样品中各组分的极性大小,即极性较弱的组份*先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如正已烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等。
2、反相色谱填料用的填料常是以硅胶为基质,表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反相色谱填料所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分*先被冲洗出,而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反向填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。
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