TSK UP-SW3000色谱柱 HILIC柱
TSKgel UP-SW3000 色谱柱采用粒径为2 μm，键合了二醇基的硅胶颗粒充填。是一款用于生物大分子分离用的尺寸排阻色谱分析柱。填料粒径为2 µm，适合用于蛋白质、抗体、酶等生物大分子的快速分析（15 cm 规格柱）以及高分辨率分析（30 cm 规格柱）。 与现有产品TSKgel SW系列色谱柱具有相同的填料表面特性。・ 填料的特性（孔隙容量、校正曲线的斜率）与TSKgel G3000SWXL 相同，所以非常适合用来分离抗体（IgG）的二聚体、单体、抗体片段。两种色谱柱尺寸可供选择：
• 4.6 mm I.D. x 15 cm 的规格可用于超高速的分离。
• 4.6 mmI.D. x 30 cm 的规格可用于超高分辨率的分析。
• 可同时兼容于UHPLC和HPLC系统
• 必须使用半微型液相系统，即，较小死体积的液相系统才能实现较为理想的色谱柱性能。
（separate report No.116）抗体**中使用的单克隆抗体，在生产、贮藏或运输过程中可能会形成二聚体等凝聚物，存在引发**反应的风险因素，故在质量控制中采用体积排阻色谱法（SEC）对单克隆抗体进行分离分析。现有的 TSKgel G3000SWXL 色谱柱常用于此用途，但仍需要更高分离度以及更短分析时间的SEC 分析技术。现在 2μm 粒径的高性能 SEC 色谱柱TSKgel UP-SW3000 已实现了商品化。在本报告中，介绍了 TSKgel UP-SW3000 色谱柱的基本特性及其分离实例。
TSKgel UP-SW3000 色谱柱的基本特性
填料的特性
表 1 所示为 TSKgel UP-SW3000 色谱柱的填料特性、色谱柱规格，以及与常用于抗体分离的现有 SW 型色谱柱的性能对比。TSKgel UP-SW3000 色谱柱是以 25nm 孔径硅胶表面导入二醇基后形成的 2μm 微粒为填料的色谱柱。与现有 SW 型色谱柱相比，具有更高的分离性能，适用于抗体二聚体及单体的分离。
表 1：填料特性、色谱柱规格
本色谱柱
现有色谱柱
TSKgel UP-SW3000
Tskgel UltraSW Aggregate
Tskgel SuperSW mAb HR
Tskgel G3000Swxl
色谱柱尺寸
4.6*300mm
4.6*150mm
7.8*300mm
基质
硅胶
官能团
二醇基
粒径
2um
3um
4um
5um
孔径
25nm
30nm
分子量排阻范围
800kDa
2500kDa（推算）
分子量测定范围
10-500kDa
10-2000kda
用途
抗体（二聚体/单体/片段）的高效分离分析
抗体（二聚体/单体/片段）快速分析
抗体（多聚体）高效分离分析
抗体（二聚体/单体）高效分离分析
一般蛋白、抗体（二聚体/单体）的高效分离分析
标准曲线和分离性能
使用 TSKgel UP-SW3000、TSKgel SuperSW3000（4μm）及 TSKgel G3000SWXL（5 μm）测定标准蛋白质的色谱图对比如图 1 所示，采用标准蛋白质制成的校正曲线对比如图 2 所示。具有相同孔径特性的 TSKgel UP-SW3000、TSKgel SuperSW3000 及 TSKgel G3000SWXL 中，甲状腺球蛋白的二聚体及多聚体不会渗入小孔内而排出，进入间隙体积（V0）（图 1），校正曲线的斜率相同（图 2）。表 2所示为样品核糖核酸酶 A 的理论塔板数。粒径较小的TSKgel UP-SW3000 比其他色谱柱的理论塔板数更高。图 3 所示为使用 TSKgel UP-SW3000、TSKgel SuperSW3000、及 TSKgel G3000SWXL 分离单克隆抗体的色谱图对比，表 3 所示为各溶出峰分离度（R）的对比。粒径较小的 TSKgel UP-SW3000 比其他色谱柱的分离度更高。（separate report No.116）