DNA甲基化检测
一、服务介绍
DNA甲基化是早发现的基因表观修饰方式之一，真核生物中的甲基化仅发生于胞嘧啶，即在DNA甲基化转移酶（DNMTs）的作用下使CpG二核苷酸5’-端的胞嘧啶转变为5’-甲基胞嘧啶。DNA甲基化通常抑制基因表达，去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。这种DNA修饰方在不改变基因序列前提下实现对基因表达的调控。脊椎动物DNA的甲基化状态与生长发育调控密切相关，比如在肿瘤发生时，抑癌基因CpG岛以外的CpG序列非甲基化程度增加，CpG岛中的CpG则呈高度甲基化状态，导致抑癌基因表达的下降。
二、实验原理
1、甲基化特异性PCR（MS-PCR）
在亚硫酸氢盐处理后，即可开展MS-PCR。通常设计两对引物，一对MSP引物扩增经亚硫酸氢盐处理后的DNA模板，而另一对扩增未甲基化片段。若对引物能扩增出片段，则说明该检测位点存在甲基化，若**对引物能扩增出片段，则说明该检测位点不存在甲基化。这种方法灵敏度高，适用性广。
2、亚硫酸盐甲基化测序（Bisulfite Genomic Sequencing PCR）
BSP的原理通过对基因组DNA进行重亚硫酸盐处理，非甲基化的胞嘧啶被脱氨基而转变成尿嘧啶，在随后的PCR反应中尿嘧啶转变成胸腺嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不能被脱氨基，在反应完成时被保留，我们将扩增得到的PCR产物进行TA克隆测序，就可以分析甲基化发生的具体情况。该方法实验结果准确性高，是甲基化检测的金标准。
三、DNA甲基化检测实验流程：
1.设计并合成引物；
2.提取DNA；
3.DNA亚硫酸盐修饰；
4.PCR扩增；
5.MSP法检测电泳产物或BSP法对PCR扩增产物测序；
6.数据分析
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