磺胺类**(ＳＡｓ)广泛用于预防和**食源性动物的**,然而过量使用这些***会导致在食用动物产品中残留。这些残留物对人体有**影响。因此，欧盟将磺胺类**列为必须严格监控的**,并制定了动物源食品中磺胺的*大残留限量为１００μｇ／ｋｇ。ＧＣ和ＧＣ-ＭＳ对肉、奶中磺胺类**残留的测定灵敏度高而且专属性强,但需要繁冗的净化和衍生步骤］,不适合大量样品的分析。液相色谱紫外检测法也有许多应用,但灵敏度低。有些分析方法基体干扰严重。
　　美国农业部食品**检查局（ＦＳＩＳ）采用荧光胺衍生的薄层色谱（ＴＬＣ）筛选方法。这种方法灵敏度、选择性较好,但重复性不够好。近年来,用荧光胺柱前衍生或柱后衍生,进行磺胺测定的液相色谱荧光检测法已成为测定动物组织多种磺胺快速分析方法］,这种方法灵敏度、选择性都较好。液相色谱与大气压化学离子或热喷雾质谱联用技术已成为确证生物组织中磺胺兽药残留的方法,但一般实验室很难配置这样的仪器。
　　本文提出了采用液相色谱电化学检测器(ＥＣＤ)测定禽肉中多种磺胺残留方法。通过与二极管阵列检测器（ＤＡＤ）进行比较,发现ＳＡ在ＥＣＤ上响应比ＤＡＤ至少高一个数量级。本法具有灵敏度高、专属性好的优点。

１实验部分
１． １仪器与试剂
　　ＨＰ１０５０型四元梯度泵；在线真空脱气机;ＨＰ１０４９Ａ电化学检测器(ＥＣＤ)，工作电极为玻碳电极,参比电极为Ａｇ／ＡｇＣｌ固体电极；ＨＰ１１００二极管阵列检测器（ＤＡＤ）；使ＤＡＤ流出液进入ＥＣＤ，用ＨＰＣＨＥＭ化学工作站同时采集双通道信号；多功能微量化学处理仪;ＳＫ＿１涡流混匀器；水为双蒸水并过Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ纯水器;甲醇为国产色谱纯试剂;磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、三氯甲烷为Ｍｅｒｃｋ公司产品;０．１ｍｏｌ／ＬＫＨ２ＰＯ４(ｐＨ为５．５);０．０１ｍｏｌ／ＬＫ２ＨＰＯ４:称１．１４ｇＫ２ＨＰＯ４€€３Ｈ２Ｏ于１０００ｍＬ烧杯,加水至９００ｍＬ,此时ｐＨ＝９,用１００ｇ／ＬＨ３ＰＯ４(磷酸水溶液)调节ｐＨ至６,转入１０００ｍＬ容量瓶，并用水定容至刻度。所用磺胺标准品均为Ｓｉｇｍａ公司产品。标准贮备溶液的配制:各称２５ｍｇ标准物于２５ｍＬ棕色容量瓶,用甲醇定容至刻度。标准工作液的配制:标准贮备溶液用甲醇逐级混合稀释成梯度溶液。工作曲线的绘制:取不同质量浓度混合标准在＜４０℃氮气流吹干,加入０．１ｍｏｌ／ＬＫＨ２ＰＯ４１ｍＬ涡流混匀溶解,经０．４５μｍ微孔滤膜过滤至自动进样小瓶中，进样分析。
１． ２色谱条件
　　流动相为甲醇-０．０１ｍｏｌ／ＬＫ２ＨＰＯ４磷酸盐缓冲液(体积比２５∶７５),流速１ｍＬ／ｍｉｎ,进样量１０μＬ;色谱柱:分析柱为卡套柱(Ａｇｉｌｅｎｔ,４．０ｍｍ×２５０ｍｍ),ＨｙｐｅｒｓｉｌＯＤＳ５μｍ，保护柱为５μｍＯＤＳ子弹头柱,４ｍｍ×４ｍｍ;ＤＡＤ紫外检测波长２６６ｎｍ;ＥＣＤ的检测电位+１．０Ｖ。
１． ３样品制备
收集刚宰杀喂养的小鸡,将鸡肉切成小片并均质,搅碎,样品放在塑料袋中密封冷冻保存。称取４ｇ肉样到５０ｍＬ具旋塞塑料离心管,加入氯仿(三氯甲烷)４０ｍＬ,于涡流混匀器上快速混匀１ｍｉｎ,放在卧式振荡器中振荡１５ｍｉｎ，充分混合;３０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ,肉样在上层,用一次性吸管吸取下层溶液，用滤纸过滤,取１０ｍＬ滤液(相当于１ｇ肉样)于＜４０℃氮气流下吹干;残渣用５ｍＬ正己烷溶解,加入１．０ｍＬ０．１ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钾溶解,快速混匀多次,每次静置分层;*后３０００ｒ／ｍｉｎ离心２ｍｉｎ,界面为黄色，仔细抽取水相过滤于自动进样瓶插件中。

２结果与讨论
２． １方法原理
　　ＨＰ１０４９Ａ电化学检测器是薄层式检测池,工作电极为８ｍｍ直径的圆盘式玻璃碳电极。本法采用恒电位安培模式,电活性物质在电极上发生氧化还原反应,产生电流。
２．２标准溶液的配制
　　实验发现,若用甲醇配制标准直接进样,在较低浓度时,色谱峰形较差;用强酸或强碱性溶液溶解的标准无峰或峰形很差;而用流动相或０．１ｍｏｌ／ＬＫＨ２ＰＯ４配成标准溶液峰形较好。
2.３流动相ｐＨ值的影响
　　改变流动相ｐＨ值在４～８,流动相ｐＨ在４～７之间无论对峰高、待测物保留时间和峰形均无影响,ｐＨ大于７峰形变差,ＤＡＤ和ＥＣＤ均如此。本法选择ｐＨ＝６。
２． ４流动相组成的影响
　　国内外文献报道多采用乙腈-缓冲溶液作流动相,本法改用甲醇-缓冲液作流动相,不但降低了成本,还降低了毒性,色谱峰尖锐对称,且分离度令人满意。许多文献方法是通过加入离子对试剂(如辛烷磺酸钠)来改善磺胺的峰形和分离。离子对试剂对ＯＤＳ色谱柱有损害,本法不必用此类试剂,仍可得到尖锐对称的峰形。通过试验发现,甲醇在流动相中的含量对保留时间影响很大。随着甲醇含量的增加,各物质保留时间明显缩短。综合考虑,本法选择甲醇含量为２５%(φ)。
２． ５电化学检测器工作电位选择
　　电化学检测电位依次按０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１Ｖ设定,注射相同体积的同一浓度的标准混合液,建立动态伏安曲线,结果表明电位在１．０Ｖ*佳。

２． ６提取与净化方法的选择
　　探索了文献报道的提取和净化方法。参考文献］的方法,采用有机溶剂提取后,用强阳离子交换柱(ＰＲＳ或ＳＣＸ)净化后,柱后衍生HPLC-ＦＬＤ或ＨＰＬＣ-ＤＡＤ测定磺胺嘧啶。该法只适用于磺胺嘧啶,其它物质回收率很低。*后,样品制备参考测定牛奶中新诺明(ＳＭＺ)残留的ＡＯＡＣ公定分析方法，经适当改进后,用离心管代替分液漏斗振荡提取,肉样在溶液上层，离心后肉样成坚实的饼状，溶液变澄清,取出有机相,并取部分提取液浓缩至干，再净化。此法适合大量样品分析。
２． ７检出限
　　将ＤＡＤ与ＥＣＤ串联,进样,同时采集双通道信号,得到的色谱图见图１Ａ和Ｂ,以３倍噪音计算,磺胺嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺甲基异€€唑检出限(ｎｇ)分别为０．２４、０．９６、２．２(ＤＡＤ)和０．０２、０．０６、０．０７(ＥＣＤ)。结果表明ＥＣＤ比ＤＡＤ检出限低一个数量级。取空白鸡肉样添加０．０５ｍｇ／ｋｇ含量的３种混标,按ＨＰＬＣ-ＥＣＤ法重复５次测定,测得回收率和ＲＳＤ分别为：磺胺嘧啶７５%,１１%;磺胺甲氧哒嗪８０%,８．０%;磺胺甲基异€€唑８２%,９．０%。本法可作为常规检测方法。
　　初步实验表明,本法也适用于其它磺胺**。