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大肠杆菌转化实验Cacl2转化法

Cacl2 转化法实验材料	大肠杆菌
试剂、试剂盒	CaCl2 氨苄青霉素 LB
仪器、耗材	离心机分光光度计摇床
实验步骤	1. 接种—个单菌落于50 ml LB培养液中，于37℃摇床培养过夜（250 r/min）。 2. 往一个2 L 的烧瓶中加入400 ml LB培养液，再加入4 ml 过夜培养液，于37℃；摇床，培养至OD₅₉₀为0.375。 3. 将培养液分装到8个50 ml 预冷无菌的聚丙烯管中，于冰上放置5~10 min，然后于4℃，1 600 g 离心7 min。 4. 细胞沉淀用10 ml 冰冷的CaCl₂“溶液重悬，于4℃，以1 100 g 离心5 min 。 5. 细胞沉淀用10 ml 冰冷的CaCl₂溶液重悬，冰上放置30 min，于4℃，1 100 g 离心5 min。 6. 用2 ml 冰冷的CaCl₂溶液重悬各管细胞，然后按每管250 μl 的量分装于预冷的无菌聚丙烯管中，立即冻存于- 70℃。 7. 按照以下各步骤用10 ng pBR322转化100 μl 感受态。 8. 将合适体积的转化物涂于含有氨苄青霉素的LB平板上，37℃培养过夜。 9. 将10 ng 加入到一个15 ml 无菌的圆底试管中，并放置冰上。 10. 将盛有感受态细胞菌的管子握在手上使菌液迅速熔化。 11. 立即将100 μl 感受态加入到管中，轻轻旋动，并放置冰上10 min 。 12. 将管故入42℃水浴2 min 进行热休克，然后加入1 ml LB 培养液于每一支试管中。 13. 于37℃置滚筒式摇床口培养1 h。 14. 将几个稀释度菌液涂布于含合适***的平板上，于37℃培养12~16 h。

Cacl2 转化法

实验材料

试剂、试剂盒

仪器、耗材

实验步骤

1. 接种—个单菌落于50 ml LB培养液中，于37℃摇床培养过夜（250 r/min）。

2. 往一个2 L 的烧瓶中加入400 ml LB培养液，再加入4 ml 过夜培养液，于37℃；摇床，培养至OD₅₉₀为0.375。

3. 将培养液分装到8个50 ml 预冷无菌的聚丙烯管中，于冰上放置5~10 min，然后于4℃，1 600 g 离心7 min。

4. 细胞沉淀用10 ml 冰冷的CaCl₂“溶液重悬，于4℃，以1 100 g 离心5 min 。

5. 细胞沉淀用10 ml 冰冷的CaCl₂溶液重悬，冰上放置30 min，于4℃，1 100 g 离心5 min。

6. 用2 ml 冰冷的CaCl₂溶液重悬各管细胞，然后按每管250 μl 的量分装于预冷的无菌聚丙烯管中，立即冻存于- 70℃。

7. 按照以下各步骤用10 ng pBR322转化100 μl 感受态**。

8. 将合适体积的转化物涂于含有氨苄青霉素的LB平板上，37℃培养过夜。

9. 将10 ng 加入到一个15 ml 无菌的圆底试管中，并放置冰上。

10. 将盛有感受态细胞菌的管子握在手上使菌液迅速熔化。

11. 立即将100 μl 感受态**加入到管中，轻轻旋动，并放置冰上10 min 。

12. 将管故入42℃水浴2 min 进行热休克，然后加入1 ml LB 培养液于每一支试管中。

13. 于37℃置滚筒式摇床口培养1 h。

14. 将几个稀释度菌液涂布于含合适***的平板上，于37℃培养12~16 h。

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