荧光蛋白知识常见问题解答
1.什么是绿色荧光蛋白?
(green fluorescent protein),简称GFP,这种蛋白质*早是由下村脩等人在1962年在一种学名Aequorea victoria的水母中发现.其基因所产生的蛋白质,在蓝色波长范围的光线激发下,会发出绿色萤光.这个发光的过程中还需要冷光蛋白质Aequorin的帮助,且这个冷光蛋白质与钙离子(Ca2+)可产生交互作用.由水母Aequorea
victoria中发现的野生型绿色萤光蛋白,395nm和475nm分别是*大和次大的激发波长,它的发射波长的峰点是在509nm,在可见光绿光的范围下是较弱的位置.由海肾(sea
pansy)所得的绿色萤光蛋白,仅有在498nm有一个较高的激发峰点.在细胞生物学与分子生物学领域中,绿色萤光蛋白基因常被用作为一个报导基因(reporter
gene).一些经修饰过的型式可作为生物探针,绿色萤光蛋白基因也可以克隆到脊椎动物(例如:兔子上进行表现,并拿来映证某种假设的实验方法.
2.绿色荧光蛋白发光原理是什么？
绿色荧光蛋白并不需要与其他物质合作,只需要用蓝光照射,就能自己发光
3.绿色荧光蛋白标记技术有什么意义?
在生物学研究中,科学家们常常利用这种能自己发光的荧光分子来作为生物体的标记.将这种荧光分子通过化学方法挂在其他不可见的分子上,原来不可见的部分就变得可见了.生物学家一直利用这种标记方法,把原本透明的细胞或细胞器从黑暗的显微镜视场中“揪出来”.传统的荧光分子在发光的同时,会产生具有毒性的氧自由基,导致被观察的细胞死亡,这叫做“光毒性”,因此,在绿色荧光蛋白发现以前,科学家们只能通过荧光标记来研究死亡细胞静态结构,而绿色荧光蛋白的光毒性非常弱,非常适合用于标记活细胞.
运用荧光蛋白可以观测到细胞的活动,可以标记表达蛋白,可以进行深入的蛋白质组学实验等等.特别是在癌症研究的过程中,由于荧光蛋白的出现使得科学家们能够观测到肿瘤细胞的具体活动,比如肿瘤细胞的成长、入侵、转移和新生.
4.红色荧光蛋白一般用什么缓冲液溶解？
红色荧光蛋白用什么缓冲液溶解，一般取决于生产厂家的说明书保存制剂，或者使用时特殊的试剂要求。正常来讲红色荧光蛋白生产后的保存试剂都是PBS（磷酸盐缓冲液），所以使用时一般用PBS来溶解。但是如果使用时有什么特别的要求，也可以使用特殊的缓冲液溶解。但是一般红色荧光蛋白用都是用磷酸盐缓冲液来溶解的。
5.什么是红色萤光蛋白RFP？
红色荧光蛋白(Red Fluorecent Protein,RFP)基因是从海葵Discoso-masp中分离出的一种新的荧光蛋白基因，其蛋白质的*大吸收光谱为583
nm，不需要任何预处理便可检测到[。红色荧光蛋白因其红荧光较强的组织穿透力，已被广泛用于动物、植物和酵母等真核细胞内基因表达的报告基因。
6.红色荧光蛋白RFP的萤光波长和激发波长？
荧光蛋白激发光源的主要产品应用：
检测转绿色荧光蛋白（GFP）基因、红色荧光蛋白（DsRed）基因植物：水稻、小麦、玉米、大豆、棉花、拟南芥
检测转GFP、DsRed基因动物：小鼠、兔子、猴子等；
检测转GFP、DsRed基因微生物：细菌、**、酵母等；
检测GFP、DsRed基因组织特异性表达；
常用荧光蛋白的激发光源的选型LUYOR-3415RG