液相色谱法测定连翘苷的含量

连翘苷具有清热、**、散结排脓等功效。主治温热、疮疡、瘰疬、丹毒、班疹、流感，可水煎服，或加入方剂中。常用于风热感冒。

1测定方法：采用高效液相色谱法。

色谱柱：AgilentTechnologiesZORBAXExtend-C184.6×250mm，5μm。流动相：乙腈-水(25︰75V/V)。流速：1.0ml•min-1。检测波长：230nm，柱温30℃。结果：连翘苷在0.005～1.0mg•ml-1范围内线性关系良好(r=0.9999);平均加样回收率为96.7%，RSD=2.7%(n=6)。结论：该方法简便易行，结果准确可靠，可适用于连翘败毒丸的质量控制。

2仪器与试剂

LC-2010A高效液相色谱仪，CLSAA-VP色谱工作站，紫外检测器;连翘苷对照品(批号：110821-200406)，由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用;连翘败毒丸为市售样品(北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂，规格6g/袋，批号：6082655;呼伦贝尔哈慈制药厂，规格6g/100粒，批号：20051201，20051205)。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

3方法与结果

3.1色谱条件与系统适用性试验色谱柱：AgilentTechnologiesZORBAXExtend-C184.6×250mm，5μm。流动相：乙腈-水(25︰75V/V)。检测波长：230nm;流速：1.0ml•min-1;柱温30℃。

3.2溶液制备

3.2.1对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥12小时以上的连翘苷对照品适量，加甲醇制成0.10mg•ml-1的对照品贮备液;再精密量取对照品贮备液适量，加甲醇制成0.05mg•ml-1的对照品溶液，即得。

3.2.2供试品溶液的制备取重量差异项下的连翘败毒丸10g，研碎，混匀，取约6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率50kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5ml，蒸干，残渣加水20ml使溶解，用三氯甲烷振摇提取5次，每次20ml，合并三氯甲烷液，回收至干。残渣用50%甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，离心，取上清液，或滤过，取续滤液，即得。

3.2.3阴性对照溶液的制备取除连翘以外的**中其余药材的十分之一量，按法制成丸，再按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

3.3专属性试验分别精密吸取供试品溶液、阴性对照溶液和对照品溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上有相同保留时间(连翘苷16.290min)的色谱峰，阴性试验无干扰，证明本法可行。

3.4线性关系考察精密吸取连翘苷对照品贮备液(浓度：0.10mg•ml-1)适量，分别置于10ml量瓶中，加甲醇定容，配成浓度分别为0.005、0.01、0.03、0.05、0.08、0.1mg•ml-1的溶液6份，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤。精密吸取续滤液各10μl，注入液相色谱仪，测得峰面积。以峰面积(A)为纵坐标，其浓度(C)为横坐标，得连翘苷的回归方程为：A=48148500.13C+25281.19，r=0.9999(n=6)。结果表明，连翘苷在0.005～0.1mg•ml-1范围内峰面积与其浓度呈良好线性关系。

3.5精密度与稳定性试验精密吸取连翘苷对照品溶液(0.05mg•ml-1)10μl，在上述色谱条件下重复进样6次，求得连翘苷溶液峰面积的相对标准偏差(RSD)为0.7%(n=6)，表明精密度较好。取同一对照品溶液，在0、4、8、12、24、48h分别进行测定，结果表明连翘苷对照品溶液在48h内稳定，RSD为0.8%(n=6)。

3.6重复性试验取供试品(批号6082655)共6份，分别按“2.2.2供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液，进行测定，求得连翘苷含量的RSD为1.1%(n=6)，表明重现性较好。

3.7加样回收率试验精密称取已知含量的样品(批号：6082655，连翘苷含量0.06mg•g-1，平均重量6.003g•袋-1)适量，共6份，分别置具塞锥形瓶中。分别精密加入连翘苷对照品贮备液(0.1mg•ml-1)各2ml，按“2.2.2供试品溶液的制备”方法操作，得回收率试验溶液，依法测定。

3.8样品含量测定分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定三批样品中连翘苷峰面积，按外标法计算其含量(n=5)，结果见表2。表1连翘苷加样回收率试验表23批样品含量测定结果。