一、氨基酸分析方法分类
氨基酸分析按其分离和检测方法的不同可分为三大类型。**类是基于阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生、光度法测定的离子交换色谱法（IEC）。此类方法由Stein和Moore两人1958年发明，并于1972年获诺贝尔奖，是当今国际标准和国家标准以及仲裁和涉外的方法。**类是所有基于反相色谱分离、柱前衍生、荧光或紫外检测的高效液相法（HPLC）。第三类是阴离子交换分离直接安培法检测的离子色谱法IC，严格说来，阴离子交换和阳离子交换都叫“IEC”，在此将阴离子交换分离、安培检测的方法归类为IC，是因为这类仪器实际上就是离子色谱仪，只不过配置侧重点为氨基酸分析。本文中对三类方法多用简称。
氨基酸分析方法的分类和特性比较表
| 方法 | IEC | HPLC | IC |
| 原理 | 阳离子交换分离、柱后茚三酮衍生光度法测定 | 高效液相反相色谱分离、柱前衍生、光度法测定 | 阴离子交换直接测定 |
| 衍生试剂 | 茚三酮 | PITC | OPA | FMOC | AQC | DABS-Cl | 无 |
| 基体干扰 | 无 | 有 | 有 | 有 | 有 | 有 | 有 |
| 多余试剂 | 不干扰 | 需除去 | 不干扰 | 需除去 | 不干扰 | 需除去 | 无 |
| 检测器 | 可见光 | UV | 荧光 | 荧光 | 荧光 | UV | 脉冲安培 |
| 检测限 | 5-10 pmol | 30pmol | 1pmol | 1pmol | 1pmol | 30pmol | 0.5pmol |
| 优点 | 方法成熟可靠。稳定性、重现性、线性均优于HPLC法，柱子寿命长，几乎可分析已知的所有氨基酸（*多可同时分离50余种） | 对一些氨基酸有很高的灵敏度，分析时间较短，仪器可一机多用（在氨基酸分析和其它分析转换时，需要更换一些部件，如柱子、缓冲液等，通常更换之后还需要较长时间重新平衡系统） |
| 缺点 | 对大多数氨基酸的灵敏度不如HPLC法和IC法。仪器专用化，售价较高 | 衍生反应和产物稳定性常受基体和过量试剂干扰，方法的稳定性、重现性、线性和可靠性不如茚三酮法，能分离分析的氨基酸种类较少。且柱子寿命短，衍生试剂一般较贵，方法对操作技术要求高。（其中个别方法的稳定性、重现性、线性等指标已接近IEC法，但衍生试剂是****��售价极高，总体成本甚至超过IEC法的仪器） | 易受**干扰，测量结果与茚三酮法有较大差异，稳定性、重现性与HPLC法接近 |
说明： 1、PITC异硫氰酸苯酯；OPA邻苯二甲醛；FMOC 9-芴基甲氧羰酰氯；AQC 6-氨基-喹啉基-N-羟基琥贝酰亚胺-氨基甲酸酯；DABS-Cl 二甲基氨基偶氮苯磺酰氯。
2、IEC法也可使用柱后OPA衍生（荧光检测），可以降低检测限到1pmol，但无法检测二级氨基酸。
二、用户如何选择适合自己的方法和仪器
氨基酸分析的方法和仪器多种多样，用户应该根据自己的实际应用情况和发展趋势来选择方法和仪器。选择时可参考以下几个方面：
是否需要对分析结果负责（如对外出具报告等）
IEC仪器使用茚三酮柱后衍生法，符合国家标准和国际仲裁标准，而IC法和HPLC法虽然总体性能也比较稳定可靠，但其测量结果与茚三酮法有较大差异，且结果难以长期重复，这对于仲裁不利。目前，IC法和HPLC法分析氨基酸一般仅用于不太深入的研究，而且主要是利用其灵敏度较高的特性。也有部分企业用来做内部质量控制（国家没有制定相关标准），但如果要考虑对外做样并出具结果报告，IEC仪器是**选择。由于国内的氨基酸分析呈现急剧上升的势头，而很多单位经济能力有限，因此也确有不少单位购买专用氨基酸分析仪作为创收手段。
一次进样需要出峰的数量是多还是少 氨基酸种类繁多、性质接近，因此氨基酸分析是色谱界公认的难题，尽管现在有多种多样的方法，但没有任何方法能够保证所有氨基酸峰能够一次进样完全的分离。仅仅从分离程度来说，好的HPLC方法*多可以一次分离检测20种左右的氨基酸峰，IC法*多可一次分离检测约30种氨基酸峰（理论上说来，IC法可达到与IEC法相当的出峰数量，但金电极的基线漂移较大，保留时间太长的峰就难以定量分析），IEC法*多一次可分离检测50种左右的氨基酸峰。从这个角度来说，如果您需要分析游离氨基酸样品，就应当选择IEC仪器。
3、 氨基酸分析频率高还是低
氨基酸样品分析频率如果达到每个星期至少1次，就可以算“频率较高”，少于每周1次就可以说是“较低”。频率较高时，应当仪器专用化（即便是用HPLC和IC法，也应专用于氨基酸分析），因为反复更换柱子和缓冲体系不仅麻烦、平衡时间长，难以保证分析结果的可靠性和重复性，而且容易损坏仪器。
氨基酸样品总量是多还是少总体的成本应考虑到做样成本，而不能只看仪器本身。HPLC做氨基酸分析时，每根柱子只能进样100－500针，而IEC仪器的柱子都超过1000针（sykam柱子使用国产试剂时大于4000针，使用进口试剂时大于6000针）。
如果都使用国产试剂，HPLC仪器单针成本平均160元人民币，IEC仪器单针成本平均不到20元人民币，IC仪器单针成本平均60元人民币（IC法无需衍生剂，但检测电极是消耗品）。此处计算了标样、缓冲溶液、衍生剂、柱子等消耗品价格，而仪器的维护保养费用相同（未计算）。下表是专用氨基酸分析仪IEC、HPLC和IC（都配置自动进样，HPLC加配氨基酸分析包）的总成本分析。
三种分析方法的总费用比较
| 总费用 | IEC | HPLC（平均值） | IC |
| 初次花费 | 65万－75万 | 30万－40万 | 55万－65万 |
| 600个样品（1500针） | 68万－78万 | 54万－64万 | 64万－74万 |
| 1000个样品（2500针） | 70万－80万 | 70万－80万 | 70万－80万 |
| 2000个样品（5000针） | 75万－85万 | 110万－120万 | 85万－95万 |
也就是说，当分析样品量超过 1000 个（进样针数大于 2500），IEC 专用氨基酸分析仪就开始成为 费用*低的仪器了。通常仪器的使用寿命超过 8 年（平均 10 年左右），只要每年的样品量大于 100 个， IEC 仪器就没有价格上的劣势。
三、哪些仪器是“氨基酸分析仪”
我们已经比较了 HPLC、IC 和 IEC 这三大类氨基酸分析方法，总的说来，它们适合不同情况下的应用， 虽然 IEC 茚三酮柱后衍生法适应范围更广泛，但仪器售价也明显要高。目前中国市场上号称是专用氨基酸 分析仪的有很多，对于用户而言，也未必需要去分辩谁是真正的专用氨基酸分析仪，而且国家仪器名录甚 至国际上都没有明确提出专用氨基酸分析仪的定义，但在中国市场，无论是使用者还是仪器厂家，一般都 是把阳离子交换分离、茚三酮柱后衍生法仪器叫作“氨基酸分析仪”。这类仪器技术门槛较高，国内目前 还没有厂家生产此类仪器，代表厂商有德国 sykam、日本 hitachi 等。而 IC 法仪器的代表是 Dionex 公司的 AAA-direct。
四、IEC 仪器之间的比较
IEC仪器也有几个厂家生产，用户该如何选择？ **，当然是满足分析需要的技术指标如分离度、重复性等要求，而其中的分离度又是更为重要的指 标，因为，色谱理论一般以分离度达到 1.2 作为两峰基本分离的判定前提，只有峰分开了，才有意义去讨 论定性和定量的重复性。 **，应考虑仪器的可靠性。如果仪器今天堵了、明天漏了，用户不仅要付出大量人力财力，分析结 果的可信度也将大打折扣。 第三，应考虑仪器的运行成本。例如是否可以使用国产试剂、柱子寿命（以多少次进样计算、而不以 多少年计算）等。 第四，应考虑仪器设计是否有利于氨基酸分析，例如是否有惰性气体保护（茚三酮极易被氧化）、是 否提供在线脱气、是否提供溶液和样品的制冷控制等。 第五，应考虑售后服务。分析过程中遇到困难是在所难免，厂家必须能够快速响应、尽快解决问题。 另外，常用备件的价格也是一个重要因素，因为用户在购买前一般难以注意到售后的问题，而很多厂家也 没有公示自己的常用备件价格，这就为将来的使用埋下了隐患，事实上，也的确有很多仪器（尤其是进口 仪器）在出现一些看似微小的故障之后，就因为维修费用太高而被“束之高阁”。
声明：
1、 本文部分资料引用自《仪器信息网》中公开的文章，在此对作者表示感谢！
2、 本文旨在为读者提供一个了解氨基酸分析方法和仪器的参考，若对文中观点存有异议， 欢迎指正。
《氨基酸分析方法及仪器比较》