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为什么流式细胞术要用同型对照?如何选择?

流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)是一种对液流中排成单列的细胞或其它生物微粒(如微球,细 菌,小型模式生物等)逐个进行快速定量分析和分选的技术。

 

一、为什么要用同型对照?

 

同型对照是使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免 疫球蛋白及亚型的免 疫球蛋白,用于消除由于抗体非特异性与细胞结合而产生的背景染色。同型对照是真正意思上的阴性对照,它不但可以用来设定流式细胞仪的电压,而且还可以帮忙省去昂贵与繁琐的重组细胞因子竞争封闭步骤。

 

二、如何选择同型对照?

 

分析流式结果时,不能因为得到了荧光信号就判断细胞表面肯定结合有相应的荧光素,从而得出细胞表达相应的抗原分子的结论,而应该比较该荧光信号与细胞的非特异性荧光,如果得到的荧光信号大于非特异性荧光,说明得到的荧光信号部分来源于荧光素的特异性荧光,就可以得出细胞表达相应的抗原分子的结论。

 

所以,确定与荧光素无关的细胞自身的非特异性类光的强弱非常重要,而设立阴性对照就是为了确定细胞的非特异性荧光。

 

看看以下3类艾美捷整理的阴性对照流式分析比较全 面的阴性对照:

1.jpg

 

第1类“negative”表示的是不加任何荧光素偶联抗体时得到的荧光信号,因为没有标记任何类光素,所以这组得到的荧光信号与荧光素无关,与细胞抗原分子CD69是否表达无关,得到的荧光信号代表的是非特异性荧光信号;

第2类“抗CD69”表示的是用抗CD69抗体标记样品细胞后得到的类光信号,虽然抗CD69抗体能修与细胞表面的CD69抗原分子结合,但是抗CD9抗体没有偶联荧光素,所以得到的荧光信号也与细胞表面是否表达有CD69分子无关,得到的荧光信号代表的也只是细胞本身的非特异性荧光信号,这种对照用于排除抗体的干扰;

第3类“IgG1-PE”表示的是标记与抗CD69抗体同种属(来源于同一物种)且同类(抗CD69-PE中的抗体IgG1类的)的非特异性抗体(IgG1)与PE荧光素偶联的同型(isotype)对照抗体(IgG1-PE)后,得到的荧光信号,这种就属于同型对照,其不能与细胞表面的CD69发生特异性结合,所以细胞表面不会结合有IgG1-PE,zui后得到的荧光信号是代表细胞本身的非特异性荧光,不属于PE荧光素产生的特异性荧光信号,这种同型对照用于排除荧光素的干扰。

 

以上3种阴性对照,并不用全部设置齐全,一般只需要设置1种阴性对照就可以,其中第3种同型对照是zui常规的阴性对照设置法。

 

艾美捷EXBIO作为流式研发专家,可为您提供zui全流式同型对照抗体:

 

宿主

同型对照

货号

名称

应用

小鼠

IgG1

11-457-C100

Mouse IgG1 Isotype Control,无标记

FC (QC tested), IP, IHC(P), IHC(F), ICC, WB, ELISA

IgG1 kappa

11-632-C100

Mouse IgG1 Isotype Control,无标记

FC (QC tested), IP, WB, IHC(P), IHC(F), ICC, ELISA

12-632-C100

Mouse IgG1 Isotype Control 无标记,低内**

FC (QC tested), IP, WB, IHC(P), IHC(F), ICC, ELISA, FUNC

1A-632-C100

Mouse IgG1 Isotype Control,APC标记

FC (QC tested)

1B-632-C100

Mouse IgG1 Isotype Control,生物素标记

WB, ELISA, IHC(F), ICC, IHC(P), IP, FC (QC tested)

1F-632-C100

Mouse IgG1 Isotype Control,FITC标记

FC (QC tested)

1P-632-C100

Mouse IgG1 Isotype Control,PE标记

FC (QC tested)

A4-632-C100

Mouse IgG1 Isotype Control,Alexa Fluor 488标记

IHC(P), FC (QC tested), ICC, IHC(F), WB

A6-632-C100

Mouse IgG1 Isotype Control,Alexa Fluor 647标记

FC (QC tested), IHC(P), IHC(F), ICC, WB

A7-632-C100

Mouse IgG1 Isotype Control,Alexa Fluor 700标记

FC (QC tested)

IgG2a

11-458-C100

Mouse IgG2a Isotype Control,无标记

FC (QC tested), IP, IHC(P), IHC(F), ICC, WB, ELISA

Mouse IgG2a kappa

1A-724-C100

Mouse IgG2a Isotype Control,APC标记

FC (QC tested)

1P-724-C100

Mouse IgG2a Isotype Control,PE标记

FC (QC tested)

PC-724-C100

Mouse IgG2a Isotype Control,PerCP标记

FC (QC tested)

IgG2b

11-801-C100

Mouse IgG2b Isotype Control,无标记

FC (QC tested), IP, IHC(P), IHC(F), ICC, WB, ELISA

IgG2b kappa

1A-692-C100

Mouse IgG2b Isotype Control,APC标记

FC (QC tested)

1B-692-C100

Mouse IgG2b Isotype Control,生物素标记

WB, ELISA, ICC, IHC(F), IHC(P), IP, FC (QC tested)

1F-692-C100

Mouse IgG2b Isotype Control,FITC标记

FC (QC tested)

IgG3

11-459-C100

Mouse IgG3 Isotype Control ,无标记

FC (QC tested), IP, IHC(P), IHC(F), ICC, WB, ELISA

L4-459-C100

Mouse IgG3 Isotype Control,DyLight 488

FC (QC tested), IHC(P), IHC(F), ICC, WB

L6-459-C100

Mouse IgG3 Isotype Control,DyLight 650

FC (QC tested), IHC(P), IHC(F), ICC, WB

IgM

11-803-C100

Mouse IgM Isotype Control ,无标记

FC (QC tested), IP, IHC(P), IHC(F), ICC, WB, ELISA

1F-803-C100

Mouse IgM Isotype Control,FITC标记

FC (QC tested)

1P-803-C100

Mouse IgM Isotype Control,PE标记

FC (QC tested)

L4-803-C100

Mouse IgM Isotype Control,DyLight488标记

FC (QC tested), IHC(P), IHC(F), ICC, WB

 大鼠

IgG2a

11-168-C100

Rat IgG2a Isotype Control ,无标记

FC (QC tested), IP, IHC(P), IHC(F), ICC, WB, ELISA

12-168-C100

Rat IgG2a Isotype Control ,低内**

IHC(P), FC (QC tested), ELISA, IP, IHC(F), ICC, WB, FUNC

1A-168-C100

Rat IgG2a Isotype Control,APC标记

FC (QC tested)

1P-168-C100

Rat IgG2a Isotype Control,PE标记

FC (QC tested)

IgG2b

11-169-C100

Rat IgG2b Isotype Control ,无标记

FC (QC tested), IP, IHC(P), IHC(F), ICC, WB, ELISA

12-169-C100

Rat IgG2b Isotype Control,低内**

IHC(P), FC (QC tested), ELISA, IHC(F), IP, ICC, WB, FUNC

1F-169-C100

Rat IgG2b Isotype Control,FITC标记

FC (QC tested)

 以下荧光标记同型对照抗体案例展示:

2.png

使用小鼠IgG3同种型对照(PPV-07)DyLight®650抗体(样品中浓度为5ug/ ml)对人外周血进行的流式细胞仪表面非特异性染色模式。

 

更多类型荧光标记的同型对照抗体:

https://www.amyjet.com/featured/flow-cytometry.shtml

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