Mabtech FluoroSpot试剂盒，高效稳定

不同于ELISpot，FluoroSpot使用的是荧光标记的检测试剂。一种分析物用生物素化抗体检测，另外一种分析物使用tag标记的抗体检测。这种实验方法的设计保证了可以在同一孔内进行2种或以上的细胞因子检测。

FluoroSpot优势： 

一：灵敏度高，操作简便，相对稳定，应用范围广等优点。

二：能够生成更多的数据，节省时间。与免*斑点相比，使用的细胞和抗原均较少。

FluoroSpot 原理： 

三明治夹心结构在荧光斑点中得以应用，不同特异性的单克隆捕获抗体混合物被包被于96孔板的PVDF膜上，生物素标记的检测抗体识别一种分泌物，tag标记的检测抗体识别其它的分泌物来实现双色或三色细胞因子分泌细胞的检测。通过带有特定荧光基团的共轭试剂放大信号斑点来检测，可用自动读板器进行分析。

三色FluoroSpot分析结果图总共可以显示7个亚群：3个单色的细胞因子，3个双色的细胞因子，1个三色的细胞群。图像显示的是一个三色FluoroSpot分析结果。用一组CEF肽刺激人的外周血单个核细胞（PBMC），分别用FITC标记IFN-γ、CY3标记IL-10和CY5标记颗粒酶B（GzB）。Overylay展示的是三个指标叠加后得到的结果。

三色FluoroSpot分析：能够更容易区分不同的细胞因子

Mabtech的FluoroSpot试剂盒用途：

1.用于分析T细胞响应，B细胞响应和分析巨噬细胞，单核细胞和树突状细胞，根据细胞因子不同的分布描绘不同的亚群。 

2.三明治夹心法结合荧光基团标记的检测试剂能够对同一个孔中两个或两个以上的分析物进行分析。 

3.对于某些分析物组合，提供带预涂板的试剂盒。预涂板是一种方便的选择，可以实现更快速的分析，同时将可变性降至*低。 

艾美捷科技作为专业的生命科学领域解决方案供应商，为您推荐Mabtech品牌的FluoroSpot“战斗装备”，适用多种种属，产品**，发表多篇高分文章。以下列举出部分的FluoroSpot试剂盒，供您参考。

PS：以上仅列出部分产品，此外Mabtech还提供10个板子的大规格包装的FluoroSpot试剂盒。

FluoroSpot试剂盒的特点和优势： 

1. 非常适合需要方便灵敏检测的用户。

2. 设计用于计数分泌多种分析物的细胞。

3. 适用人、猴、小鼠、牛、羊等多种种属的试剂盒可供选择。

4. 包含不同组分的多样化试剂盒可供客户选择。

5. 含预包被板的试剂盒可实现更快速的分析，同时将可变性降至*低。

常见疑难问题解答： 

1.哪种细胞类型适合FluoroSpot分析？ 

FluoroSpot测定基本上可以应用于任何想要研究单细胞水平的蛋白质分泌的细胞。尽管到目前为止该技术主要用于鉴定抗原活化的T细胞分泌细胞因子和B细胞分泌抗体，但可以分析非粘附细胞和粘附细胞。 

2.冷冻细胞可以用于FluoroSpot吗？

冷冻保存的细胞非常适合FluoroSpot。但是细胞的状态对实验结果有很大影响，必须规范冻存/复苏程序以获得高活力的细胞。 

3.完成实验操作后需多长时间读取FluoroSpot板，即荧光基团的稳定性如何？

如果板保持干燥并且在黑暗中，荧光非常稳定，在分析前允许将板保存较长的时间（即几个月）。但是，为了获得*佳结果，我们建议在操作完成后一周内对板进行分析。

 4.分析FluoroSpot板需要什么类型的分析仪？

FluoroSpot需要分析仪来显示荧光斑点，因为眼睛无法观察到斑点。我们建议使用配备滤光片的自动化系统：激发光（ex）490 nm /发射光（em）510 nm（FITC），ex 550 nm / em 570 nm（Cy3），ex 640 nm / em 660 nm（Cy5）和四色分析也包括ex 380 nm / em 430 nm（DAPI）。滤波片应对特定波长具有选择性，以避免渗透。为了正确测量多分泌细胞，分析仪需要能够创建叠加分析。

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高分文章参考： 

1. Memory B Cells Activate Brain-Homing, Autoreactive CD4+ T Cells in Multiple Sclerosis. Cell. 2018.

2. Respiratory Syncytial Virus Infects Regulatory B Cells in Human Neonates via Chemokine Receptor CX3CR1 and Promotes Lung Disease Severity.Immunity.2017.

3. Microbiota epitope similarity either dampens or enhances the immunogenicity of disease-associated antigenic epitopes.PLoS One. 2018.

4. Comparison of ELISpot and FluoroSpot in the Analysis of Swine Flu-Specific IgG and IgA Secretion by in Vivo Activated Human B Cells. Cells. 2012.

5. Immunogenicity of synthetic peptide constructs based on PvMSP9E795-A808, a linear B-cell epitope of the P. vivax Merozoite Surface Protein-9. Vaccine. 2019.

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