慢病毒包装专用驯化293T细胞

细胞处理：

1、细胞复苏

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含2mL完全培养基的离心管中混合均匀。1000 rpm或400g离心5min，弃上清，5mL DMEM完全培养基重悬细胞后转移至T25培养瓶（或6cm培养皿）中培养过夜。**天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2、细胞传代

当细胞密度达90%以上即可进行传代。轻柔弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS缓慢轻柔清洗1次，目的是将培养基中的FBS洗掉，以免影响胰酶的消化。随后加入含EDTA的0.25％胰酶（T25瓶0.5-1mL），置于37℃培养箱中消化2-3min（不超过5min），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入2-4mL完全培养基终止消化。用移液枪或巴氏管轻轻捶打均匀后吸出，1000 rpm或400g离心5min，弃上清，加1-2mL完全培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新培养瓶或皿中，添加5mL DMEM完全培养基十字交叉法混匀后继续培养。

3、细胞冻存

收到细胞后建议在培养前三代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，使用细胞计数仪进行计数，随后离心去上清，按照每1mL冻存液冻存5×106左右个细胞计算，取适量高效高活细胞冻存液（货号MJ105）吹打混匀细胞后按照每个1mL分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。将用高效高活细胞冻存液冻存的细胞直接放进-80℃超低温冰箱中无需程序降温，可长期冻存（>5年），同时记录好冻存管在冰箱中的位置以便后续查阅和使用。

注意事项：

1、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物**台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要**后方能丢弃；

2、本产品为无菌状态，使用本产品时应注意无菌操作，避免污染；

3、本产品仅供科学研究使用。

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