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生化实验室15大常识
标签 离心机 移液器 ** cc 克隆载体
[导读] 生化实验室15大常识。
1.在重蒸酚中为什么加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇?
保存在冰箱中的酚，容易被空气氧化而变成粉红色，这样的酚容易降解DNA，一般不可以使用。为了防止酚的氧化，可加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇。8-羟基喹啉是带有淡黄色的固体粉沫，不仅能抗氧化，并在一定程度上能抑制DNase的活性。
2.如何将不同构型的质粒DNA区别开?
由于不同构型的DNA在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率不同，cccDNA的泳动速度*快，通过凝胶电泳方法可将不同构型的DNA区别开。
3.用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么?
异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。
4.用乙醇沉淀DNA时，为什么加入单价的阳离子?
用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl或NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。
5.在提取RNA时经常使用异硫氰酸胍，有什么作用?
RNA是一种极易降解的核酸分子。高浓度强变性剂异硫氰酸胍使细胞结构迅速被破坏，使RNA从细胞中释放出来。同时高浓度异硫氰酸胍还使细胞内的RNA酶失活，使释放出的RNA不被降解。
6.蛋白印迹中封闭液的作用?
封闭液的作用是封闭未吸附蛋白的部位，以减少非特异性结合背景的影响。常用的封闭液有脱脂奶粉、小牛血清等。
7.DNA通常保存在什么缓冲液中?
采用TE缓冲液，Tris-HCl的缓冲系统，加入EDTA可以螯合二价金属离子进而抑制依赖于二价金属离子的DNA酶的活性，对DNA起到保护作用。
8.在酶切反应缓冲液中为什么加入BSA?
通过提高溶液中蛋白质的浓度，对酶起保护作用。
9.简单的克隆载体必需包括什么?
复制起点;选择标记：主要是抗性基因;多克隆位点：便于外源DNA的插入。
10.用酚抽提细胞DNA时，有什么作用?
使蛋白质变性。
11.在分离DNA时，要使用EDTA，为什么?
EDTA是金属离子螯合剂，螯合二价离子，抑制核酸酶的活性。
12.在分离DNA过程中，造成DNA分子断裂的因素有哪些?
核酸酶降解;化学降解;物理剪切。
13.使用离心机应注意什么?
首先应该根据自己的实验需求选择合适的离心机和转子以及离心管，使用离心机时的工作转速不应该超过离心机、转子以及离心管的*大允许转速。离心前注意严格平衡样品。安装转子和转子盖要规范、准确。离心时要留人看守，发现离心机异常应立即关闭离心机。离心结束后要安放好转子。
14.分子生物学实验室常用的**方法有哪些?
高压蒸汽**、干热**、化学药剂**、过滤**。
15.使用移液器有哪些注意事项?
垂直吸液、慢吸慢放;选择合适的量程范围，不能超过量程使用;选择与移液器匹配的枪头，安装枪头时不要用力太猛;移液器每日用完后，应旋到*大刻度。