19. High Five细胞有任何其它名称吗？ High Five细胞也被称为Trichoplasia ni 5B1-4和BTI-TN-5B1-4。
20.在High Five无血清培养基中去污剂的浓度是多少？ High Five无血清培养基中去污剂的浓度：0.025 g/L Tween-80，1.0 g/L Pluronic Poly-all。
21.High Five细胞用多大的密度冻存？ 3.0x10E6 cells/ml
22.在我的果蝇培养基中发现形成白色沉淀，加热后溶解。它是什么？对我的细胞有害吗？ 可能是谷氨酰胺沉淀，但是更可能是L-酪氨酸沉淀。培养基中谷氨酰胺的浓度比典型的2mM高6倍。酪氨酸的浓度比在RPMI 1640中高25倍，而且比谷氨酰胺更加难以溶解。沉淀也可能是不止一种成分的复合物。它可能是由于贮存在局部温度较低的地方引起。只要沉淀在培养条件下可以溶解，对实验不会有不利的影响。
23.如何从T25瓶中转移sf9细胞？能用胰蛋白酶消化吗？ 我们强力推荐使用脱落细胞的方法，因为这项技术破坏性*小，生活力*高。通过使用巴氏德吸液管，让细胞上培养基流动。作为一种选择你也可以轻轻拍打培养瓶。只有在**必要的情况下，才使用胰酶消化细胞。胰酶消化一个T25瓶的sf9细胞：1)去除培养基。2) 用2ml 1xPBS（足以覆盖细胞表面）洗涤细胞，去除PBS.3) 加入2ml 1x胰酶EDTA（恰好覆盖细胞表面）。4) 37 ℃孵育5到10分钟。在仪器下检测看到5分钟后它们正在向上移动。5) 向细胞中加入2ml 细胞培养液，移入锥形管，用2ml培养液洗瓶壁，移入同一锥形管中。（培养基中的FBS终止了胰酶的活性。）6) 离心（1100rpm）沉淀细胞。去除培养基。7) 用新的培养基重新悬浮细胞。传代。
24.在Sf9, Sf21, 和high Five细胞悬浮培养时，肝素的使用量是多少？ 为了防止悬浮培养细胞聚集的形成，使用肝素浓度为10单位/毫升细胞悬液。
25.如何评估ES细胞合格的胎牛血清？ 使用D3 ES细胞。这是一个对于胎牛血清中生长促进、生长抑制和分化因子非常敏感的细胞系。相关生长效率分析： 当ES细胞以非常低的密度传入包含10％胎牛血清的生长培养基中，检测开始和支持ES细胞克隆的能力。细胞毒分析： 当以非常低的密度传入包含30％胎牛血清的生长培养基中，检测ES细胞和feeder细胞的生长能力。
相关形态学和分化分析： 检测胎牛血清支持未分化ES细胞克隆的能力。通过碱性磷酸酶活性评估分化程度。未分化的ES细胞小颜色深红粉红，分化的细胞较大，丰满，颜色较浅。 所有的分析在没有ESGRO的情况下进行的，培养基中出现ESGRO会掩盖由胎牛血清所导致的问题。（ESGRO或LIF经常用来保持ES细胞处于未分化状态。） 经过培养发现，大约8批中有1批可以用来培养ES细胞。
26.在重新冻存sf9细胞前，它可以传多少代？随着传代的次数的增加，它的感染能力会降低吗？ 通常情况当细胞经过30次传代后，应该返回冻存。无论什么时候记数时，都应该检查细胞活力。如果超过95％的细胞保持有活力和在大约30小时左右加倍，细胞仍然可以使用。如果活力和加倍时间下降，它们的感染力将不在是有效的。
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