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技术文章

各种细胞**检测方法比较
各种细胞**检测方法比较
类型
检测名称
检测方法
主要特点
体内功能检验
迟发型超敏反应法
皮下注射抗原或者负载抗原的DC，观察红斑、硬块的发生与大小
优点：体内功能性检验，相对比较容易操作；
缺点：只是一种初筛，加阳性与假阴性比较严重。
体外表型检测
TCR可变区分析法
使用针对T细胞受体（TCR）可变区的流式抗体来对表达特定可变区的T细胞计数
优点：可以提供关于可变区使用的群体分布；
缺点：识别同一种抗原的TCR的可变区可能不相同；单抗不够丰富，不能检测所有种类的可变区。
多肽MHC五聚体法(Tetramer)
用荧光标记的MHC-肽五聚体去结合T细胞，进而做流式分析
优点：能做精细分析，灵敏较高；
缺点：只能分析MHC-I类分子，四聚体制备复杂，成本高昂，需要预先合成T细胞表位肽。
TCR CDR3序列分析
用PCR的方法扩增T细胞受体互补决定区3的序列，测序
特点：简单灵敏，但还不能用于群体分析；
该方法目前刚刚开展，还不能**评价。
体外功能检测
细胞因子ELISPOT法
抗原与待测PBMC混合，通过ELISPOT检测阳性细胞频率
优点：灵敏度*高，单细胞水平，特异性强，结果直观可信，成本低，高通量；
缺点：血液PBMC的分离还未实现自动化；还有待于发展双因子、多因子ELISPOT技术。
**细胞增殖试验（3H胸苷掺入法）
待测PBMC、辐射过的APC、抗原混合孵育，特异性的T细胞增殖，通过掺入的3H胸苷来确定增殖水平
优点：是传统方法，研究比较透彻；
缺点：需要放射性操作，非特异性反应比较强，并且灵敏度低。
细胞内细胞因子染色法
抗原与待测PBMC混合，把细胞因子保留在细胞内，然后用流式抗体染色、计数
优点：单细胞水平，可以同时检测多个参数、多种因子；
缺点：操作复杂，灵敏度相对较低，容易出现假阳性。
细胞因子ELISA法
抗原与待测PBMC混合，然后用定量ELISA法测量细胞受刺激而分泌到上清液中的细胞因子浓度
优点：特异性强，可以对细胞因子浓度定量，有以全血作为检测样品的潜力；
缺点：只能做群体水平检测，灵敏度不够高。
细胞因子mRNA定量法
通过定量RT-PCR方法检测受刺激的细胞中细胞因子mRNA的水平
优点：有利用各种组织样品的潜力，灵敏度高，高通量；
缺点：容易出现假阳性，只能做群体水平检测。
CTL杀伤法（51Cr释放法）
制备51Cr标记的表达抗原的靶细胞，与待测PBMC混合，通过51Cr释放来确定靶细胞被杀伤的水平
优点：*直接的功能性检测；
缺点：靶细胞制备困难，试验周期长，需要放射性操作，灵敏度低。
极限稀释计数CTL法
待测PBMC稀释到一系列孔中，体外增殖，然后加入靶细胞判定每孔裂解的阴阳性，*后通过泊松统计法确定CTL极限稀释倍数
优点：对CTL的频率计数比直接CTL杀伤法更准确，灵敏度也有所提高；
缺点：实验及其复杂，工作量极大，并且因为有些CTL前体细胞不能增值而导致结果偏低。
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