【实验目的】
1. 蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本制备。
2. 观察组织的兴奋性、刺激与反应规律以及骨骼肌收缩的特点。
【实验原理】
青蛙和蟾蜍是两栖类动物，其生存环境较简单，离体组织和器官所要求的条件也较简单。坐骨神经和腓肠肌属于可兴奋组织，把他们置于人工配制的林格液中，其兴奋性在几个小时内保持不变。若给坐骨神经一个适宜的刺激，可在神经和肌肉上产生一个可传导的动作电位，肉眼可以看到一次肌肉的收缩和舒张，表明神经和肌肉兴奋了一次。
【实验对象】
蟾蜍或蛙。
【实验器材】
蛙板、蛙钉、玻璃分针、粗剪刀、眼科剪刀、尖镊子、线、林格液、培养皿、滴管、锌铜弓、控针、瓷盘。
【方法和步骤】
坐骨神经腓肠肌标本的制备可采用离体或在体的方法。
1.离体坐骨神经腓肠肌标本制备
（1）破坏脑脊髓：取蟾蜍1只，以左手示指压其头部前端使其尽量前俯，中指与示指夹住其前肢，拇指抵住其骶部，使整个躯干做*大屈曲，后肢悬空。探针自枕骨大孔处垂直刺入，到达椎管，随即将探针改变方向刺入颅腔，向左右两侧不断搅动，彻底捣毁脑组织。将探针退出至枕骨大孔处，转向后刺入椎管，捻动探针使其逐渐刺入整个椎管内，完全捣毁脊髓。脑脊髓完全破坏的标志是：下颌呼吸运动消失，反射消失，四肢松软。
（2）去除头部和内脏：左手握住蟾蜍后肢，此时躯干上部及内脏全部下垂。
右手持粗剪刀在骶髂关节前1cm处剪断脊柱，剪除全部躯干及内脏组织，注意勿损伤神经。
（3）去皮：用圆头镊子夹住脊柱，注意不要碰到神经，捏住皮肤边缘，逐步向下牵拉剥离皮肤。全部皮肤剥除后，把标本置于盛有林格液的培养皿中。
（4）洗净双手和胜过的全部手术器械。
（5）分离两后肢：避开坐骨神经，用粗剪刀从北侧剪去骶骨，然后治中经将脊柱剪成左右两半，再从耻骨联合中央剪开两腿，将已分离的下肢标本浸入盛有林格液的培养皿中保存。
（6）完成坐骨神经腓肠肌标本。
1）游离坐骨神经：取出一下肢，用蛙钉固定于蛙板上。固定时要注意坐骨神经和腓肠肌韩上。先用玻璃分针治脊柱侧游离坐骨神经腹腔部，然后顺股二头肌和半膜肌之间的坐骨神经沟纵向分离暴露坐骨神经的大腿部分直至腘窝，并将坐骨神经从脊柱根部剪下（可连一小块脊椎骨）。在分离过程中，把神经周围的结缔组织去除干净，并把神经的细小分支剪断，但要注意不要用金属器械触碰神经，也不要对神经过度牵拉，且应不断滴加林格液使神经保持湿润。
2）完成坐骨神经腓肠肌标本：把游离的坐骨神经搭在腓肠肌上，在腓肠肌的跟腱处穿线结扎，用组织剪在靠结扎线远端剪断跟腱。从膝关节周围开始剪掉大腿所有的肌肉，用粗剪刀将股骨刮干净。然后，在股骨中部剪去上段股骨（留1.5cm长的股骨），沿膝关节剪去小腿（注意保留完整的腓肠肌）。一个附着股骨上的腓肠肌并带有支配腓肠肌的坐骨神经的标本就完成了
2.在体坐骨神经腓肠肌标本制备
（1）取一只蟾蜍洗净，按操作程序破坏蟾蜍脑和脊髓。
（2）剥离一侧下肢自大腿根部起的全部皮肤，然后将标本俯卧位固定于蛙板上。
（3）游离坐骨神经，并在神经下穿线备用。然后，分离腓肠肌的跟腱穿线结扎，并连同结扎线将跟腱剪下，一直将腓肠肌分离至膝关节，在膝关节旁钉蛙钉固定住膝关节。至此，在体标本制备完成。
3.观察项目 用浸有林格液的锌铜弓轻触坐骨神经，观察腓肠肌的反应。如腓肠肌发生收缩，表明标本具有正常生理活性，兴奋性良好，说明实验操作成功。将离体坐骨神经腓肠肌标本放在盛有林格液的培养皿中，以备实验之用。
【注意事项】
1. 在制作离体坐骨神经腓肠肌标本分离两腿时，注意不要将坐骨神经剪断。
2. 游离坐骨神经时用玻璃分针，避免使用金属器械。勿损伤、过度牵拉神经和肌肉。
3. 及时添加林格液，保持标本湿润。
【思考题】
为什么锌铜弓一接触坐骨神经就能使腓肠肌发生收缩？