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ct26细胞培养步骤与传代方法的介绍

CT-26细胞是以N-nitroso-N-methylurethane-(NNMU)诱导形成的未分化结肠癌细胞株。它克隆形成的细胞株命名为CT26.WT(ATCC CRL-2638)。用包含编码典型肿瘤相关抗原(TAA)beta-半乳糖苷酶(beta-gal)的lacZ基因的逆转录病毒载体LXSN稳定转染CT26。即使CT26.CL25表达了典型的TAA beta-半乳糖苷酶，在正常小鼠中CT26.CL25和CT26.WT的生长率与致死率也保持基本一致。与CT26.CL25(ATCC CRL-2639)一起可用作测试免疫治疗程序的模型，并用于研究宿主免疫反应。

培养步骤：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。**天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

传代方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

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