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技术文章

细胞培养有关知识汇总

1. 实验进行前,无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟**,以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面,并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后,才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株,且即使培养基相同亦不共享培养基,以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后,将实验物品带出工作台,以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后,再进行下一个细胞株之操作。 

2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞,必要物品,例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置,其它实验用品用完即应移出,以利于气流之流通。实验用品以70 % ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在抬面之中央无菌区域,勿在边缘之非无菌区域操作。

3. 小心取用无菌之实验物品,避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口,亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后,以手夹住瓶盖并握住瓶身,倾斜约45° 角取用,尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。

4. 工作人员应注意自身之**,须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作,并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。操作过程中,应避免引起aerosol 之产生,小心毒**品,例如DMSO 及TPA 等,并避免尖锐针头之伤害等。

5. 定期检测下列项目:
a. CO2 钢瓶之CO2 压力
b. CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水,每周更换)。
c. 无菌操作台内之airflow 压力,定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜,预滤网(300
小时/预滤网,3000 小时/HEPA)。

6. 水槽可添加**剂(Zephrin 1:750),定期更换水槽的水。

实验用品

1. 种类︰
a. 细胞培养实验用品均为无菌,除了玻璃容器与pasteur pipet 外,其它均为塑料无菌
制品。
b. TC 级培养盘表面均有coating 高分子物质以让细胞吸附,培养容器种类有Tflask,
plates, dishes, roller bottle 等,依实验需要使用。
c. plastic sterile pipet: 1 ml, 2 ml,5 ml, 10 ml, 25 ml
d. 塑料离心管: 15 ml, 50 ml,均有2 种不同材质,其中polypropylene (PP) 为不透
明材质,polystyrene (PS) 为透明材质,可依实验需要而选择适合材质之离心管。
e. glass pastuer pipet: 9 inch,用以抽掉废弃培养液等。
f. 玻璃血清瓶(Pyrex or Duran glassware):100 ml, 250 ml,500 ml,1000 ml

2. 清洗︰
a. 新购玻璃血清瓶先以0.1~0.05 N HCl 浸泡数小时,洗净后才开始使用。
b. 用过之玻璃血清瓶,以高压蒸汽**,洗净后分别用一次与二次去离子水冲洗干
净,勿加清洁剂清洗。

3. **︰
a. 实验用玻璃血清瓶以铝箔纸包覆瓶盖,高压蒸汽**121 oC, 15 lb, 20 分钟,置于 oven 中烘干。
b. 实验用玻璃pasteur pipet 以干热**170 oC, 4 小时。
c. 液体或是固体废弃物可用10 % hypochloride 溶液(次氯酸,即漂白水) 或是蒸汽高 压**121 oC, 15 lb, 20 分钟处理。

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