第六、培养基在使用过程中应注意的问题： （1） 培养基在使用前需37 oC预热或在室温平衡后再使用。 （2） 细胞培养过程中，吸取过培养液的吸管不能再用火焰烧灼，防止残留在吸管内的培养基焦化，将有害物质带入培养液中。 （3） 尽量缩短各种液体、细胞的暴露时间。 （4） 避免液体间、细胞间的交叉污染。 （5） 配制完全培养基时，配制的量*好在2周内用完为好。 第七、血清的有关问题： 新生牛血清：新出生牛5天内取血制成 小牛血清：小牛出生16周以内采血制成。 胎牛血清：（进口血清）要求剖腹取胎制成。 国内厂家往往不能做到，经常把出生2天以内采血称为胎牛血清。 根据血清的生产工艺及血红蛋白、内**含量又分为： （1）.特级胎牛血清：40纳米过滤，内**含量≤10EU， 血红蛋白含量≤10mg/dl。 （2）.优等胎牛血清：经过3次100纳米过滤， 内**含量≤25EU/ml， 血红蛋白含量≤25mg/ml。 （3）.标准胎牛血清：3次100纳米过滤，低内**， 低血红蛋白含量。 （4）.活性碳/葡聚糖处理血清：**含量大大降低。 （5）.透析型胎牛血清：次黄嘌呤和胸腺核苷含量大大降低。 第八、其他细胞培养用液：除培养基、血清、谷氨酰胺外，其他几种液体也属必须，不可省略。 （1）双抗：200倍，（1ml/支）其终浓度为青霉素100U/ml；链霉素100ug/ml，-24 oC保存。 （2）L-谷氨酰胺：100倍，（1ml/支）， 终浓度2mM，-24 oC保存。 （3）丙酮酸钠：配制浓度50mM，4ml/支，终浓度为1mM/ml， -24 oC保存。 （4）Hepes液：配制浓度1M（5ml/支），一支Hepes加入到200ml 完全培养基中，终浓度为25mM/ml，常温保存。 第九、支原体污染及检测： （1）支原体污染在细胞培养中*常见、不易被查觉，但支原体污染可显著影响细胞功能干扰实验结果。支原体是介于**和病毒之间的目前所知能独立生活的*小微生物，它无细胞壁，形态呈高度多形性，*小直径0.2um，可通过滤器。 目前通过对国内100余株/系细胞的检测，形势不容乐观。污染率达30% ~ 60% 。课题组从国外引进细胞株/系也经常出现支原体的污染。支原体在污染细胞后，它通过影响细胞的DNA、RNA 的合成及急速消耗培养基中的氨基酸来抑制细胞的生长，并能降低细胞的融合率。因此，在运用各种细胞系进行实验研究时，首先要证明所用细胞有无支原体的污染。 （2）支原体污染后，培养基可不发生浑浊，细胞病变轻微或不明显，因此难以发现。目前，支原体检测的方法有以下几种。 （a）相差显微镜观察；（b）.低张处理地衣红染色法； （c）荧光染色法；（d）.酶标法； （e）PCR法：使用该方法进行检测。 优点：灵敏度高，检测耗时短，样品量小 （只需50ul细胞培养用液上清）。 缺点：引物及制剂费用较高。