小鼠单克隆抗体亚型鉴定试剂盒使用说明说明书

小鼠单克隆抗体亚型鉴定试剂盒使用说明

(产品货号：FS5300)

原理

本实验采用双抗体夹心 ELISA法。用抗小鼠Ig多抗包被于酶标板上，样品中的 Ig与多抗结合，加入分别针对小鼠 IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3，IgA，IgM，kappa light chain，lambda light chain 的特异性抗体，形成**复合物连接在板上，加入酶底物TMB，出现蓝色，加终止液硫酸，颜色变黄，在450nm处测OD值，Ig浓度与OD值成正比，可通过颜色鉴定出标本中Ig亚型。

试剂盒组成（2-8℃保存）

准备试剂与收集血样

1. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。
2. 杂交瘤细胞上清 : 将样本以 1× PBST 1:100 稀释，例如 10 uL 杂交瘤细胞上清 + 990 uL 1×PBST。推荐稀释范围为 1:20-1:200。
3. 腹水 : 将样本以 1×PBST 1:100000 稀释，例如 1 uL 腹水 + 1 mL 1×PBST（1:1000），再取上述混合液 5 uL + 495 uL 1× PBST。推荐稀释范围为 1:50000-1:200000。
4. 纯化抗体 : 将样本以1×PBST 稀释至 200 ng/mL，推荐稀释浓度为 20 ng/mL-1 ug/mL。
5. 洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）

检测程序

1. 加样：每孔各加入待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃30分钟。
2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。。
3. 每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。
4. 洗板：同前。
5. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗处反应15分钟。
6. 每孔加入100ul终止液混匀。
7. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

结果计算与判断

1. 结果判读。结果可以对照下图以肉眼判定，也可以通过酶标仪读取 OD450。颜色*深或是 OD 值*高孔对应的即为相应亚型。

试剂盒性能

            1. 灵敏度：*小的Ig 检测浓度小于6ng/ml。

2. 特异性：可同时检测重组或天然的小鼠Ig。不与小鼠其它细胞因子有交叉反应。
3. 重复性：板内、板见变异系数均小于10％。

注意事项

            1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。

2. 洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致**度误差及OD值错误地升高。

            3. 检测时所有试剂都要恢复到室温。板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。

            4. 试剂盒使用超敏TMB溶液，若显色过深会出现絮状物，属正常现象，不影响结果判读。

            5. 说明书中试剂盒组成为96T的量，48T的量应减半！

6. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。仅用于科研，不能用于临床诊断！