大鼠双氢睾酮(DHT)诊断试剂盒(酶联**法)

大鼠双氢睾酮(DHT)诊断试剂盒(酶联**法)

(用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内)

原理

采用酶联**竞争法检测血清中双氢睾酮含量。首先用羊抗兔睾酮包被微孔板，制成固相一抗，然后加入待测血清、辣根过氧化物酶标记双氢睾酮，使之形成包被抗双氢睾酮抗体-双氢睾酮（HRP）复合物，标记双氢睾酮的结合量与血清中的双氢睾酮量成反比。经显色后在酶标仪测定吸光值(OD值)，通过计算机或作图拟合浓度－吸光度曲线，反算出待测血清中双氢睾酮含量。

试剂盒组成（2-8℃保存）

准备试剂与收集血样

1. 收集标本：血清、血浆（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反复冻融。
2. 实验各组份试剂使用前充分摇匀。
3. 洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）

检测程序

1. 加样：每孔依次各加入标准品，待测样品100ul。
2. 每孔加入酶标抗原25ul（空白孔除外），充分混匀，置37 ℃暗处反应60分钟。
3. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。
4. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗处反应15分钟。
5. 每孔加入100ul终止液混匀。
6. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值

结果计算与判断

1. 使用线性拟合功能，可选择logit直线拟合方式。先将空白孔的吸光值设为本底（或称非特异，空白）。校准品S0到S5的浓度作为X，对应的吸光值减本底后作为Y，选择Logit拟合方式，拟合方程：ln(百分结合率/（1-百分结合率）)=BLog(浓度)+A，从拟合线上计算出待测血清的浓度。从拟合线上计算出待测血清的浓度。

检验方法的局限性

溶血、乳糜血样本响测定结果。

试剂盒性能

            1. 灵敏度：*小的DHT检测浓度小于0.1ng/ ml。

2. 特异性：与其他**没有交叉反应。
3. 重复性：变异系数均小于10％。

注意事项

            1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。

2. 洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致**度误差及OD值错误地升高。

            3. 板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。

            4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。

5. 本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！