奥林巴斯显微镜——冷冻断裂装置技术应用

奥林巴斯显微镜——冷冻断裂装置技术应用

      奥林巴斯显微镜的断裂在特殊的冷冻断裂仪中进行。冷冻断裂仪有多种商品出售，其复杂程序也有很大差别，但原理都是相同的，它们都是一个真空喷镀仪和一个冷冻断裂装置组成的。现在以本室的日立HHS-5GB冷冻断裂仪为例说明其原理。

      奥林巴斯显微镜的冷冻断裂装置。其主要部件有两个：刀座和样品座，均由导热良好的铜制成。刀座上安置一刀片，它可沿样品座上的导轨顺斜面下滑。样品座上可安放样品杯。当拉动塑料制成块时，刀座下滑，将样品切断。在刀座上方与前方各有一孔，供喷铂与喷碳用。样品座上可装上蚀到加温器，使样品升温。刀座前还有一隔热板，以阻挡喷镀时的热辐射。为保证整个装置有良好的导热、滑动与切断性能，每次使用前均应认真擦拭，除去上面的油污、水份和氧化层。必要时可用抛光膏，丙酮清洗表面。

      奥林巴斯显微镜使用时，将刀座和样品座置入液氮中冷冻待液氯停止沸腾后，取出，并在室温下迅速将经过冷冻的样品连同样品杯一起装到样品座上，再将刀座放在样品座导轨上方，下面垫一塑料文撑块，插入隔热板，然后将整个装置再次放入液氮冷却。待液氯沸腾停止，立即提出，放到真空明镀仪的喷镀台上，系上支撑块的拉绳，接通温度控制器，盖上真空罩开始抽真空。

      奥林巴斯显微镜真空喷铵仪内的真空度达到样品温度时，通过快门把手迅速拉动真空罩内的支撑块，刀座即从样品座的斜面上滑下，并将样品切断，在样品杯内留下一个带裂面的样品。

      有时奥林巴斯显微镜需要研究腹表面的结构，这就要使样品慢慢升温，令冰升华，把膜内外表面暴露出来，这一过程称为蚀到。蚀刻速度与温度和真空度有关。具体作法是，在样品断裂后，在真空度下，用蚀刻加温器使样品温度慢慢升高，并在该条件下维持3到10分钟。

      奥林巴斯的断裂或蚀刻后的样品均需喷镀。喷镀的目的是在暴露的样品表面造成一个连续的，具有足够反差并富有立体感的薄膜，印制备样品表面的复型。

      奥林巴斯显微镜喷镀分两步进行。先在与样品成45度的方向通过喷铂孔喷镀。为此，先要在真空度下，使带有钥珠的碳棒预热，再加大电流使铂在2-3秒内熔融气化，当刚刚出现碳化时，即终止通电。**步为喷碳，其喷碳方向与样品表面垂直。每次喷碳时间为1秒，总计可喷4-5次。每次间隔3-4秒。间歇喷碳的目的是防止样品因过热而发生蚀刻。喷碳是为了在样品表面形成一个联系的膜。

   以上所述的奥林巴斯显微镜冷冻超薄切片制备法适用于形态，细胞化学或**标记研究。制备过程中样品要通过一系列的水溶性介质，可称为湿法。湿**使样品中的可溶性成分流失，因此不能用于这些成分的研究。为研究细胞中的可扩散性、水溶性成分，应当使用于法制备超薄切片。