大肠菌群的检验方法及标准的理解-ATP荧光检测仪技术文章
一、方法：1、MPN法（九管法或发酵法）：国家标准。2、平板法：商检出口检测法。3、3M测试片法：商检推荐使用方法。
二、标准的理解：表达方式：大肠菌群：阴性：(<50个/克或<100个/克)。说明两个问题：一是方法：平板检测法。二是稀释倍数是100倍（现在检验稀释倍数有零倍；10倍；100倍；1000倍）：
1、<100个/克的概念是稀释100倍的稀释液同时接种在两个平板上，其中一个平板上可以出一个大肠菌群，为阴性；<50个/克的概念是稀释100倍的稀释液同时接种在两个平板上，大肠菌群不得检出，为阴性。
2、我们现在所有出口产品除鱼子外都使用是10倍稀释，所以检验报告只要有数字都是带一个零的数字，如50、80、120、230等（原来为什么就采用10倍稀释而不采用100倍稀释说不清）。
3、现在鱼子检验使用100倍稀释法，几乎没有再出现阳性，即便出现，复测后一般都不会再有。因此大肠菌群阴性不是一个没有的概念，而是在某种条件下不得检出的概念。
三、现有的工艺条件能否生产出大肠菌群纯阴性的产品呢，回答是否定的。今年3月份对鳕蟹原料及产品共计13个样品（其中有3个加热**）在36度条件下，进行了12、24、36、48小时培养试验（10倍稀释），
（一）、试验结果：
1、未培养以前13个样品均未大肠菌群检出。
2、没有经**10个样品，经36度12小时的培养大肠菌群*少500个/克，*多53000个/克。
3、调味肩肉两个样品（75—80度15分钟**），玉（98度2分钟**），48小时培养，大肠菌群一个未检出。
（二）、试验结论：
1、原料（鳕蟹肯定比鳕鱼子原料好）中大肠菌群肯定有，为什么没有检出，因为我们的检验检验方法10倍稀释造成的。
2、我们现有的加工工艺以及生产条件不可能生产出纯阴性大肠菌群产品。因此在我们接受一项加工标准时不能轻易作出大肠菌群阴性的承诺。
3、把大肠菌群控制在100个/克以内，就我们的现有加工条件下和管理肯定没有问题（鳕鱼子加工完全可以说明这一点。因为它是经过5—7天常温条件加工都能做到其它肯定没有问题）。
根据国家1994年颁布的食品卫生检验方法微生物学部分，大肠菌群(Coliform bacteria)系指一群在37℃24H能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。它们是人类和温血动物肠道正常菌群的主要成员。**粪便中的大肠菌群的含量为：108—109个/克。
大肠菌群主要是由大肠杆菌科中四个菌群内的一些**所组成，即大肠埃希氏菌（ⅠⅡⅢ型）、枸橼酸杆菌（ⅠⅡ型）、克雷伯氏菌（ⅠⅡ型）、及阴沟大肠杆菌。大肠菌群中大肠埃希氏菌Ⅰ和Ⅲ型的特点是：对靛基质、甲基红、V—P和枸橼酸盐利用四个生化反应分别为“++--”通常为典型的大肠杆菌，而其它类大肠杆菌则被称为非典型大肠杆菌，每克粪便中约含有109个大肠埃希氏菌。所能引起腹泻的大肠杆菌有四组：分别是产生**、致病性、侵袭性大肠杆菌和出血性大肠埃希氏菌（O157：H7）。1982年美国西部**暴发，1996年夏季在日本流行。
大肠埃希氏菌对加热的抵抗力比其它肠道菌要强。但除少数菌株外，都可被巴氏**法所杀死。大肠菌群随粪便排出体外后，其存活时间与肠道主要致病菌大致相似，即在自然界的水中可存活数周或数个月，在冷藏条件下存活更久。
粪便内除一般正常**外，同时也有一些肠道致病菌，如沙门氏菌，志贺氏菌，结核杆菌和肠道病毒等。因而食品中有粪便污染，必须看作对人体健康具有潜在危险。
典型大肠杆菌在污泥中生存一定时间后，其生理特性就会发生改变。所以大肠菌群的生化分类是不稳定的，是可以改变的。大肠菌群的检验步序采用三步法：GB乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。
**总数:
1、取25克样品打碎，放于含有225ML**盐水中，制备1：10；1：100；1：1000稀释液。2、每种稀释液分别取两个1ML放入**培养平皿内，加15ML46℃营养琼脂培养基，并作空白对照试验。3、待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1度温箱内培养48±2H。4、根据查表报告菌落数。
大肠菌群：
一、试管法。1、以25克检样打碎放于含有225ML**盐水中，制备1：10；1：100；1：1000稀释液。2、用1ML稀释液接种于单料乳糖胆盐发酵管，每一个稀释度接三个试管，置36±1℃温箱内，培养24±2H。如果不产气，则报告大肠菌群为阴性，产气则接下列程序进行：⑴分离培养：将产气发酵管分别接种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±1温℃箱内，培养18—24H，然后取出观察菌落状态，并作革兰氏染色和证实试验。⑵在上述平板上，挑取可疑大肠菌群1—2菌落，进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36±1℃培养箱内培养24±2H，观察产气情况，如果乳糖管产气，革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告大肠菌群阳性。⑶结果报告：根据证实为大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表报告，每100克样品大肠菌群数。
二、固体培养基测定法；1、选取适宜的三个连续稀释度的样品液，每个稀释液接种两个**平皿，每皿1ML，并作空白对照试验。2、将冷却至45±0.5未℃结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）10—15ML倾注于每个平皿中，旋转平皿，将培养基与稀释液充分混匀。3、待琼脂凝固后，再加3—4ML VRBA覆盖平板表层。翻转平板，置36±1℃培养18—24H。5、选用有30—150个菌落平板，计数平板上出现典型和可疑菌落。典型菌落为紫红色，菌周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5MM或更大。6、证实：从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，移种于BGLB肉汤管内，36±1℃培养24和48H，观察产气情况，产气为阳性。7、结果报告：产气试管百分比，乘平板菌落数，再乘稀释倍数，即为报告大肠菌群数。如：10-4样品稀释液1ML，在平板上有100个典型和可疑菌落。10个接种BGLB肉汤管，证实6个阳性，则该样品的大肠菌群数为100*6/10*104=6*105个/克。
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