大肠杆菌O157:H7试剂盒 Reveal, GeneQuence
产品简介
Reveal大肠杆菌O157:H7检测系统可用于快速鉴定各种食品中大肠杆菌O157:H7,完成对大肠杆菌O157:H7的检测和初步鉴别只需要8小时。
产品详细信息
Reveal®大肠杆菌O157:H7菌检测系统
AOAC官方方法
No.2000.13(8小时富集) No.2000.14(20小时富集)
主要用途
Reveal大肠杆菌O157:H7检测系统可用于快速鉴定各种食品中大肠杆菌O157:H7,完成对大肠杆菌O157:H7的检测和初步鉴别只需要8小时。
测试原理
本系统利用不同富集培养基,它能够为大肠杆菌O157:H7提供易利用的营养成分,以及其它大肠杆菌O157:H7生存及快速生长的必要因子。使用Reveal培养基,可以在8小时内获得结果。使用**学分析指南(BAM,1998)或USDA/FSIS提供的富集培养基,结合Reveal检测装置,可以在20小时内完成检测.
将少量富集培养物(120μl)滴加到Reveal 检测卡的圆形样品区内,样品通过毛细管作用渗过含特异性大肠杆菌O157:H7抗体(与胶体金颗粒相偶联)的试剂区。如果样品中存在抗原(即大肠杆菌O157:H7),它将与胶体金标记的抗体结合。该抗原-抗体复合物渗过试剂区,经过含有大肠杆菌O157:H7抗体(分布呈带状)的硝化纤维膜。该含金**复合物被捕获并聚集在这个区域,从而显示一条可见的线。剩余的样品继续迁移而进入位于膜末端的废液贮存处。
试剂区也含有针对广谱抗原的金复合物(指示剂),无论大肠杆菌O157:H7存在与否,它都会被样品溶液释放。胶体金复合物对照指示剂通过膜迁移到阴性对照捕获区(含针对广谱抗原的抗体区),捕获并集结成一条可见线。无论大肠杆菌O157:H7抗原存在与否,都会在对照区形成对照线,以保证检测过程操作正确无误。
主要使用者
该测试系统旨为熟悉大肠杆菌O157:H7分离与鉴定中无菌操作技术的人员而设计的。建议不具备微生物基础知识的使用者参加Neogen公司的技能培训。
规格-对比性能研究
以下数据显示该检测系统对大肠杆菌O157:H7具有很高的特异性及灵敏度,研究也表明, Reveal大肠杆菌O157:H7对USDA/FSIS Rev.4,LC38高水平筛选具有明显优势,其中一项研究被AOAC/FSIS引用(Sharar & Rose,1994),结果表明该方案的性能标准接近或超过其它任何筛选方法.规格如下:
Reveal装置 USDA标准
灵敏度 99.9% >97.0%
特异性 99.4% >90.0%
假阴性率 <1.0% <2.0%
假阳性率 <1.0% <9.6%
效率 99.7% >94.0%
快速富集生长会产生104到105大肠杆菌O157:H7 CFU/ml阳性反应
提供的材料
Reveal检测试剂盒
20个单独包装的大肠杆菌O157:H7检测装置
20个移液管
Reveal 8小时培养基或20小时培养基
选择材料
参考该说明书后面的其它培养基,可以和Reveal大肠杆菌O157:H7检测系统配合使用
试剂盒不提供的必需品
无菌袋
**分离器或替代品
计时器
8小时检测系统
13×
5ml无菌吸管
水浴或其它热源(如:本生灯,微波炉)
20小时检测系统
新生霉素钠
储藏
不用时,检测装置应储存于2
不同物品的检测
本装置可有效地用于许多物品中大肠杆菌O157:H7的检测,请与Neogen公司代表联系,获得一份确认检测物品的修正表格,或者对特殊物品的研究材料
培养注意事项
除了下述富集方法制备的样品外,Reveal大肠杆菌O157:H7还适用于其它培养方法制备的样品中大肠杆菌O157:H7的检测。请与Neogen联系以获得更多有关的信息。
警惕
1 不要使用过期的培养基
2 打开小袋前,让检测装置温度升至室温
3 使用水化培养基须在6小时内准备
4 培养时间和温度尤为重要,否则会导致错误结果
5 在培养过程中样品袋不能扎得过紧,以便于空气交换;这对大肠杆菌 O157:H7生长及抗原表达至关重要
6 使用8小时培养基时无菌水应该到
7 使用8小时检测系统时,富集的培养物的检测应在培养后的4小时内完成
使用20小时检测系统时,富集的培养物的检测应在培养后的8小时内完成
8 适当采用良好微生物实验室操作规程
一、样品准备和培养
A 8小时检测系统
1 培养基制备-将1瓶Reveal 8小时培养基(或Reveal 8小时改良培养基)加入到**的无菌袋内,加入225ml
2 加样-取
参考办法:将袋子放到摇床内,用正常速度下混匀2分钟。
3 温育-松散地紧闭袋子42±
不要密闭袋子,空气交换对大肠杆菌O157:H7适宜生长及抗原表达是必需的
4 混匀-8小时培养后,从温箱中取出袋子,抓牢袋子离顶部2-3英寸处,支撑底部,并用一边到另一边的方式剧烈混匀。
5 样品处理
(1) 使用无菌吸管,移取5ml样品到聚丙烯或玻璃试管内,加热:
·如果使用聚丙烯试管,放置于水浴中20分钟;使用玻璃试管,放置水浴中10分钟;
·或者将试管放置于微波炉中,沸腾即可。
(2) 沸水中取出试管,放置到室温(15
即可对样品检测,步骤见下。
B 20小时检测系统
1培养基制备-将1瓶Reveal 20小时培养基(或Reveal 20小时专用培养基)加入到无菌袋内,加入225ml 36±
新生霉素改良EC肉汤(mEC+N)
蛋白胨
胆盐#3
乳糖
磷酸氢二钾(二元碱)
磷酸二氢钾(一元碱)
氯化钠
蒸溜水
如果有必要,在**前用1N HCl调整pH到6.9±0.1,
2 加样-加入
3温育-松散地紧闭袋子,36±
不要密闭袋子,空气交换对大肠杆菌O157:H7适宜生长是必需的
4 混匀-20小时培养后,从温箱中取出袋子,抓牢袋子离顶部2-3英寸处,支撑底部,并用一边到另一边的方式剧烈混匀。
即可对样品检测,步骤见下。
二 、用Reveal检测
A 在使用之前,放置检测装置到室温下(
B 从锡箔袋中取出必要数量的大肠杆菌O157:H7检测装置,放置在平面上,对每个样品贴上标签
C 用塑料移液器取样品
警告:对煮沸过的8小时样品:
不要旋涡、搅拌或摇动样品
不要搅动样品底部的颗粒
只移取液体样品
D 使移液器垂直于检测装置样品区上面,无论使用8小时或20小时检测系统,加入5滴样品到检测装置样品区内
参考方法:使用移液器,加入120µl样品至样品区
E 检测装置显色15分钟后观察并记录检测结果。由于过度显色,20分钟后观察的结果是不准确的。
提示
如果加入适量的样品到检测装置后没有液体溢出,可以多加一滴或数滴,颗粒物会取代必要量的样品开始层析流检测。
四、结果的解释
外观表现 结果
15分钟内在C、T区都出现显色线 阳性
只有C区出现显色线,T区没有显色线 阴性
如果C区没有显色线,无论T区出现显色线与否 无效
五、确认
初步鉴定为阳性的样品应该用被认可的USDA/FSIS或**学分析指南(BAM)中的大肠杆菌O157:H7检测方法进行确认,“步骤二”培养袋中富集的样品可以用于确认试验。