【amresco碱性磷酸酶化学发光底物】热销中0410

关键字：amresco碱性磷酸酶化学发光底物

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试验技术服务系列产品。
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进口移液器耗材系列产品。
进口原料药系列产品。
细胞培养中常用培养基

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细胞培养中常用培养基
1、RPMI-1640 Medium,RPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养，是目前应用十分广泛的培养基。主要用于悬浮细胞培养。其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成**细胞、T细胞**瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。2、Minimum Essential Medium(MEM),也称*低必需培养基，它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。成分简单，可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。MEM-Alpha一般用于培养一些难培养细胞类型，而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养。3、DMEM-高糖(标准型)是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养,更适合高密度悬浮细胞培养。适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。4、DMEM-低糖(标准型)是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养。低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。5、DMEM/F12,DMEM/F12培养基适于克隆密度的培养。F12培养基成分复杂，含有多种微量元素，和DMEM以1：1结合，称为DMEM/F12培养基(DME/F12medium)，作为开发无血清配方的基础，以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。为了增强该培养基的缓冲能力，改良之一是在DMEM/F12(1：1)中加入15mMHEPES缓冲液。6、McCoy’s 5A,McCoy’s 5A Medium 主要为肉瘤细胞的培养所设计，可支持多种(如骨髓、皮肤、肺和脾脏等)的原代移植物的生长，除适于一般的原代细胞培养外，主要用于作组织活检培养、一些**细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。例如Jensen大鼠肉瘤成纤维细胞、人**细胞、HT-29、BHL-100等上皮细胞。7、Iscove’s Modified Dulbecco Medium (IMDM),Guilber 和Iscove将Dulbecco’Medium 改良为 Iscove’s Medium，用于培养红细胞和巨噬细胞前体。此种培养液含有硒、额外的氨基酸和维生素、丙酮酸钠和HEPES。并用硝酸钾取代了硝酸铁。IMDM还能够促进小鼠B**细胞，LPS刺激的B细胞，骨髓造血细胞，T细胞和**瘤细胞的生长。IMDM为营养非常丰富的培养液，因此可以用于高密度细胞的快速增殖培养。8、M-199 Medium,1950年，Morgan成功研制出具有确定化学成分的细胞培养液，即M-199，主要用于鸡胚成纤维细胞培养。此培养液必须辅以血清才能支持长期培养。M-199可用于培养多种种属来源的细胞，并能培养转染的细胞。9、Leibovitz Medium (L-15),L-15培养液适用于快速增殖瘤细胞的培养，用于在CO2缺乏的情况下培养肿瘤细胞株。此培养液采用磷酸盐缓冲体系，氨基酸组成进一步改良，并由半乳糖替代了葡萄糖。10、Ham’s F-10培养基：适应小鼠细胞、人类二倍体的培养。11、Ham’s F-12培养基：可以在加入很少血清的情况下应用，特别适合单细胞培养和克隆化培养，是无血清培养中常用的基础培养液。12、William’s Medium E：用于大鼠肝上皮细胞的长期细胞培养。13、MCDB 131 培养液：用于培养内皮细胞。14、Opti-MEM I Reduced Serum Media：用于培养造血细胞。15、植物血凝素(PHA)：增加细胞转化和DNA合成。
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移液器的简易保养
 使用随移液器赠送的工具和说明书,可以很容易地在实验室内拆装移液器并维护保养
(一)移液器短期保养<
每天开始工作时,检查移液器外表是否有灰尘和污迹,尤其是管嘴连件部分.建议用70%的乙醇擦拭清洁。
(二)移液器长期保养
如果移液器每天都需要使用，则建议每三个月清洁并校准一次。
(三)移液器清洁移液器：(按如下操作)
(1).按说明书拆开移液器。
(2).检查并擦拭灰尘和污迹。
(3).只能用70%的乙醇擦拭，管嘴连件和推出器可浸泡在乙醇中过夜。
(4).活塞、O形环和弹簧涂上硅油。
(5).装上并复原移液器。
注意：清洁后的移液器需要校准。
(四)移液器高温高压**
对管嘴和移液器**，请遵循以下指导
(1).管嘴在121度高温高压20分钟后，装其放置在常温或烘箱中，待水汽蒸发后再使用。
(2).整支Focus和Digital移液器、Freshman和彩色移液器的管嘴连件，以及电子移液器的管嘴连件，也按121度高温高压20分钟的条件**。
(3).**后的移液器必须放置在室温下两小时后方可使用。
(4).**后的移液器在使用前需要进行校准
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如何选购抗体？选购时需要考虑哪些方面的问题？
    1.该定制单抗还是多抗？首先应该考虑的就是定制的抗体是应用于什么实验，需要的量是多少？
对于科研用户来说1. 抗体常常应用于WesternBlotting、IP等实验中，对于抗体的特异性有一定的要求，但并不是特别的强调2. 往往在研究很多新的蛋白时，并不确定新蛋白是否很重要，是否会是将来很长一段时间的研究重点，所以抗体用量也不大所以针对科研用户，在定制新的蛋白的抗体时，我们强烈建议首先制备多抗用于实验，当得到了理想的实验结果并需要长期的使用该抗体时再考虑制备单抗。当然，如果您对该抗体的特异性要求特别高（多抗的特异性已无法满足实验要求，比如应用于流式细胞术等）时，还是应该定制单抗
对于工业用户来说1. 抗体往往应用于检测定量实验或者功能性实验，对于抗体的特异性要求非常之高2. 目标蛋白基本上都是已知的确定有相当商业开发价值的，而且产品一旦形成，用量会非常大所以针对工业用户，基本上可以直接定制单抗
    2.该选多肽还是蛋白作为抗原呢？
需要根据抗体应用于什么实验，以及您所能获得的材料来决定  1. 实验过程中蛋白处于天然状态，这时使用的抗体识别的一般是蛋白的构象表位和线性表位；这样的实验主要有CO-IP、FACS、Neutralizing/Blocking以及Elisa法检测天然蛋白等2. 实验过程中蛋白处于变性或半变性状态，这时大部分的构象表位已被破坏，抗体识别的一般都是线性表位；这样的实验主要有：Western、IHC/ICC/IF等以多肽作为抗原制备的抗体，识别的是线性表位，在使用时蛋白处于变性或半变性状态下，结果可以令人满意；但不能够保证识别天然蛋白以蛋白作为抗原制备的抗体，识别蛋白的线性和构象表位，基本上所有的实验都可以应用，所以，用蛋白作为抗原应是**，但是在多肽抗原已可满足实验要求而且得到蛋白有一定难度的情况下，以多肽作为抗原制备抗体更加合适。
    3、什么情况应该考虑用设计多肽做抗原？
答：如果氨基酸序列已知，但是由于基因克隆或表达等原因得不到抗原蛋白，或者仅需要得到针对抗原蛋白某几个特定表位的抗体，就可以采用多肽合成的方式得到抗原。例如仅需要生产针对蛋白质某个区域的特异抗体，比如研究蛋白质N端的前体物，可以设计N末端的多肽抗原。如果抗体的使用目的是识别修饰的氨基酸，如磷酸化的丝氨酸、苏氨酸或者酪氨酸，乙酰化赖氨酸等，就必须对多肽进行相应的修饰。一般情况下抗血清能够识别用来**的多肽序列，但是不一定识别天然蛋白质的折叠结构。非连续性抗原的抗体能否识别抗原决定簇取决于用于抗体生产的多肽是否存在二级结构。
    4、设计多肽做抗原时的几点基本原则？
答：识别区域的选择原则一般说来*理想的抗原性识别区域应具备亲水、位于蛋白表面和结构上易变形性等特点。既要考虑其**原性、特异性，还需考虑其合成难度等。通常有以下几点建议。

1、序列长度在8-20个氨基酸残基之间（如果太短，就有多肽太特殊、所产生的抗体与天然蛋白之间的亲和力（结合能力）不够强的风险，同样，如果序列长度超过20，将有可能引入二级结构，所产生的抗体失去特异性的可能，而且肽链越长，通常合成难度增大，不易获得高纯度的产品）；2、尽可能是在蛋白表面；3、保证该段序列不形成α-helix；4、N，C端的肽段比中间的肽段更好；避免蛋白内部重复或接近重复段的序列；5、避免同源性太强的肽段；6、交联可以交联在N，C两端，选择依据就是交联在对产生抗体不太重要的一端；7、序列中不能有太多的Pro，但有一两个Pro有好处，可以使肽链结构相对稳定一些，对产生特异性抗体有益。
    5、原核表达含GST标签的蛋白制备抗体时，需要切掉GST标签吗？
答：如果目的蛋白很大且之后的实验不受GST影响的话，GST标签是不用切掉的。但是如果目的蛋白小于20KD的话，建议通过实验切除GST标签。
    6、抗体的保存：
答：小包分批，避免多次反复冻融。短期：4度冰箱保存。长期：-20度，一般需要加入甘油，BSA等。
    7、关于抗原的常识
答：对抗原的要**纯度越高越好，尤其是初次**所用的抗原。如为细胞抗原，可取1×107个细胞作腹腔**。可溶性抗原需加完全福氏佐剂并经充分乳化，如为聚丙烯酰胺电泳纯化的抗原，可将抗原所在的电泳条带切下，研磨后直接用以动物**。还有一些半抗原，如多肽，在**之前是需要耦联一些蛋白，如KLH，BSA等。 病毒类的抗原，可以直接用于**。如果是蛋白，一般来说，蛋白的纯度要在90％以上，浓度在1mg/ml以上，分子量>10kd。一般*好融解在无毒的缓冲液中 ，建议溶解在PBS中。
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大鼠TNF-α  ELISA试剂盒使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中TNF-α含量。实验原理大鼠TNF-α  ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠TNF-α水平。用纯化的大鼠TNF-α抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入TNF-α，再与HRP标记的TNF-α抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的TNF-α呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中大鼠TNF-α浓度。大鼠TNF-α  ELISA试剂盒注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间*好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，*好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔**孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请*后乘以总稀释倍数(×n×5)。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9．本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
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培养基的几大分类
由于各种所需要的营养不同，所以培养基的种类很多。据估计目前约有数千种不同的培养基，这些培养基可根据所含成分、物理状态、以及不同的使用目的等而分成若干类型。
 培养基的几大分类
1.按照培养基的成分来分，培养基按其所含成分，可分为合成培养基、天然培养基和半合成培养基三类。(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分**，重复性强，但价格较贵，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。(2)天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养**。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，所以常被采用。(3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。
 培养基的几大分类
2.按照培养基的物理状态分，培养基按其物理状态可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基三类。(1)固体培养基。是在培养基中加入凝固剂，有琼脂、明胶、硅胶等。固体培养基常用于微生物分离、鉴定、计数和菌种保存等方面。(2)液体培养基。液体培养基中不加任何凝固剂。这种培养基的成分均匀，微生物能充分接触和利用培养基中的养料，适于作生理等研究，由于发酵率高，操作方便，也常用于发酵工业。(3)半固体培养基。是在液体培养基中加入少量凝固剂而呈半固体状态。可用于观察**的运动、鉴定菌种和测定噬菌体的效价等方面。
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 培养基的几大分类
3.按照微生物的种类分，培养基按微生物的种类可分为**培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基和霉菌培养基等四类。常用的**培养基有营养肉汤和营养琼脂培养基；常用的放线菌培养基为高氏1号培养基；常用的酵母菌培养基有马铃薯蔗糖培养基和麦芽汁培养基；常用的霉菌培养基有马铃薯蔗糖培养基、豆芽汁葡萄糖(或蔗糖)琼脂培养基和察氏培养基等。
 培养基的几大分类
4.按照培养基用途分，培养基按其特殊用途可分为加富培养基、选择性培养基和鉴别培养基。(1)加富培养基。是在培养基中加入血、血清、动植物组织提取液，用以培养要求比较苛刻的某些微生物。(2)选择性培养基。是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基。利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。(3)鉴别培养基。是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微生物。
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人Elisa试剂盒应用定性夹心**检测技术，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条，这些多肽是中国型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原 性很强的肽段，分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育，如果其中存在HEVIgM抗体，这些抗体 就会与HEV的多肽抗原结合，并固定在上面，洗板除去其它非特异性抗体和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根过氧化物酶) 酶结合物，经**次孵育后，酶结合物就会与**次孵育结合上的HEVIgM抗体相结合，洗板除去未结合的酶结合物，加入TMB底物溶液，在 第三次孵育时会发生酶-底物反应，只有那些含有HEVIgM抗体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化，加入硫酸溶液终止酶和底 >物间的反应，并在波长:450nm处测量O.D.值,按照人Elisa试剂盒的测试标准,O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性.