RNA纯化试剂盒适用于从细胞和组织中提取总RNA,用TransZol Up裂解样品,加入氯仿后,溶液分为无色水相和粉红色有机相,RNA在水相中;用硅胶膜离心柱特异吸附水相中的RNA,与其它总RNA提取方法相比,既具有TransZol Up裂解能力强、提取量高,应用范围广的优点,又具有离心柱提取RNA纯度高的优点。
所有步骤均可以在室温进行,但是应该迅速操作,减少RNA降解机会。
1. 冰上RNA样品加入RNase-free water补足至100μl,加入350μl 溶液RC,混匀。
2. 加入250μl 无水乙醇,混匀,无需离心。
3. 上一步所得溶液和可能有的沉淀一起转入吸附柱RA中(吸附柱套在收集管内),4℃ 12,000 rpm 离心45秒,弃掉收集管中的废液,将吸附柱重新套回收集管。如需去除DNA微量残留,可在本步骤后进行DNA酶柱子上直接消化,详见附录。
4. 加0.5ml漂洗液RW(请先检查是否已加入乙醇),4℃ 12,000 rpm离心45秒,弃废液。
5. 加0.5ml漂洗液RW,4℃ 12,000 rpm 离心45秒,弃废液。
6. 4℃ 13,000 rpm 离心2分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
7. 取出吸附柱RA,放入一个RNase free离心管中,根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加50-80μl RNase free water(事先在 65-70℃水浴中加热效果更好),室温放置2分钟,12,000 rpm离心1分钟。如果需要较多RNA,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,离心1分钟,或者另外再加30μl RNase free water,离心一分钟,合并两次洗脱液。
洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要RNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是*小体积*好不少于30μl,体积过小降低RNA洗脱效率,减少RNA产量。
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