RatioWorks BCFL,酸*BCECF的代替品*是美国AAT Bioquest生产的BCFL染料，细胞内pH在许多细胞事件中起着重要的调节作用，包括细胞生长，钙调节，酶活性，受体介导的信号转导，离子转运，内吞作用，趋化作用，细胞粘附和其他细胞过程。近年来，pH敏感的荧光染料已广泛应用于监测细胞内pH的变化。使用荧光pH指示剂的成像技术还使研究人员能够以更大的空间分辨率和采样密度研究这些过程，这可以使用其他技术（例如微电极）来实现。其中，2'，7'-双-（2-羧乙基）-5-（和-6）-羧基荧光素（BCECF）是受欢迎的pH探针，因为它可用于按比例监测细胞的pH。然而，所有商用BCECF AM是至少三种异构体的复杂混合物，批次之间的比率不同，这使BCECF应用变得复杂。开发BCFL是为了克服与BCECF AM相关的异构体难题。作为BCECF，BCFL表现出pH依赖性的双重激发，与BCECF基本相同。它的pKa约为7.0，也与BCECF相同。与BCECF一样，BCFL的双激发光谱在454 nm处具有等吸收点，应使BCFL成为良好的激发比pH指示剂。BCFL比例成像使细胞内pH值测定基本上独立于几个可变因素，包括染料浓度，光程长度，细胞渗漏和光漂白速率。BCFL，AM是单一异构体，因此pH值的测量比BCECF，AM更可重复，由许多不同的异构体组成 该BCFL是BCFL AM的酯酶水解产物，可与BCFL AM一起用作参考标准。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供的RatioWorks BCFL,酸*BCECF的代替品*。 

操作方法

 1.用pH 3到10（3、4、5、6、7、7.5、8、10）制备一系列50 mM磷酸盐缓冲液

 2.制成1 mM DMSO储备溶液。如果在-20°C下储存，则DMSO储备液可保存6个月。

 3.制作 1：将1000稀释液放入不同的pH缓冲液中以得到1uM。

 4.在Ex / Em = 500/535和430/535 nm下测量荧光比。

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