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荧光实时定量PCR完全攻略-多功能混匀仪技术文章
荧光实时定量PCR完全攻略-多功能混匀仪技术文章
荧光实时定量PCR完全攻略-多功能混匀仪技术文章
1,什么是定量PCR
以参照物为标准,对PCR终产物进行分析或对PCR过程进行监测,从而达到评估样本中靶基因的拷贝数,称为定量PCR.定量PCR的可行性定量一般是在PCR扩增的指数期进行的.
2,定量PCR定量的理论依据是什么
特定的待扩增基因片段起始含量越大,则指数扩增过程越短,当扩增速率趋于稳定后,则无论原来样品中起始模板含量多少,*终扩增片段的含量通常是一样的. 理想的扩增结果:Y=X×2n 其中Y代表扩增产物量, X代表PCR反应体中的原始模板数 n为扩增次数; 理论上PCR扩增效率为100%,PCR产物随着循环的进行成指数增长,但实际上NA的每一次复制都不完全,即每一次扩增中,模板不是呈2的倍增长;实际应为:Y= X(1+E)n ,其中E 代表扩增效率:E = 参与复制的模板/总模板,通常E≤1,E在整个PCR扩增过程中不是固定不变的.通常X 在 1~105拷贝,循环次数n≤30时,E 相对稳定,原始模板以相对固定的指数形式增加,适合定量分析,这也就是所谓的指数期;随着循环次数n的增加(>30次),E值逐渐减少,Y 呈非固定的指数形式增加,*后进入平台期.
转自生命科学论坛
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