293T细胞培养步骤
基尔顿生物科技(上海)有限公司,成立于2005年,改名基尔顿生物科技(上海)有限公司,基因组学、转录组学、蛋白质组学、代谢组学、生物化学、病理检测、基因检测等技术在科研中的应用和推广。
293T细胞由293细胞派生,同时表达SV40大T抗原,含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。
293T细胞培养过程:
1.将移液器和移液枪、15ml离心管、离心管架、75cm2新的细胞培养瓶放于生物**柜中,按照生物**柜的标准操作规程,将生物**柜的紫外开启半小时。
2. 将含10%胎牛血清和100U/ml双抗的DMEM及PBS放于37℃水浴锅中预热。
3.将已长到80%-90%的293T细胞培养瓶从37℃,5%的CO2培养箱中取出,先用75%的酒精喷洒于瓶表面,将细胞培养瓶旋转放于生物**柜中,用无菌的移液管吸净其中的培养基,加5ml的预热的PBS洗涤一次,吸净PBS。
4. 将含EDTA-0.25%tyption用PBS稀释两陪到五倍,向该75cm2的细胞瓶中加入3ml稀释好的EDTA-0.25%tyption,让其充分平铺于细胞表面。盖好瓶盖,将细胞瓶放在显微镜下观察,直到细胞变圆,加含10%胎牛血清的DMEM终止反应,用移液管轻轻将瓶上的细胞吹下,将细胞液移到15ml无菌的离心管中,1000rpm离心3分钟。
5.将离心上清吸弃掉,用手指轻轻拍打离心管底将底部细胞分散开,再加3mlDMEM培养基将分散的细胞重悬稀释开,取量的细胞液进行n倍稀释后计数,按照细胞计数标准操作规程进行。
6. 计数好之后细胞传代密度按照2~5×104个细胞/cm2进行传代培养,每个75cm2的培养瓶中加10mlDMEM培养基,放于37℃,5%的CO2培养箱中培养。
7. 24小时后观察细胞状态,待细胞长到80%-90%时进行下一次传代培养。
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