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  文件名称:  ****分析步骤
  公司名称:  上海恒远生物科技有限公司
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                                      ****分析 

一般固体食品多选用浸渍、洗脱、索氏回流方法等,将样品和提取液混合后搅拌3040min,或快速搅拌3min;液体食品则多选用液液分配的方法。从动物组织中提取****时,为了降低动物蛋白质对实验结果的干扰,同时为使与某些蛋白质结合的**(如赭曲霉**Aochratoxin AOTA)有效释放出来,在提取溶剂系统中可适当加入一些蛋白水解酶以提高回收率。必须对样品提取液进行分离纯化,在确保不损失待测**的前提下除去干扰杂质,以保证测定结果的准确度。通常是将提取的有机溶剂经石油醚或正己烷处理,以除去脂质和杂质。但这一方法较为烦琐,且效果也不尽如人意。柱色谱法是*常用的净化方法,其具体方法虽因样品不同而有所差异,但其基本操作是相同的。 

****含量的检测方法一直是制约****与人类**研究进展的关键。****含量的检测方法通常分为三类:①理化检测方法,包括层析、气相色谱、液相色谱、气()质联用等;②生物学检测方法,包括皮肤毒性实验、致呕吐实验、种子发芽实验等;③**化学检测方法,利用抗原抗体反应的原理进行****检测,目前较为常用的是酶联**吸附试验(EusA)。三类方法中以**化学检测法灵敏度*高,但因需要特殊的抗体而受限制。

 ****的分析目前*常用的方法是理化检测方法,分析过程一般分为以下几个步骤。

 一、提取

从样品中提取****回收率的高低对于检测结果的准确性影响很大。食品基质严重影响****的提取。食品基质不同,所采用的提取方法和溶剂系统各异。一般固体食品多选用浸渍、洗脱、索氏回流方法等,将样品和提取液混合后搅拌3040min,或快速搅拌3min;液体食品则多选用液液分配的方法。从动物组织中提取****时,为了降低动物蛋白质对实验结果的干扰,同时为使与某些蛋白质结合的**(如赭曲霉**Aochratoxin AOTA)有效释放出来,在提取溶剂系统中可适当加入一些蛋白水解酶以提高回收率。 

在食品和农产品基质中提取****所选择的溶剂取决于待测**种类(一种还是多种)、**性质、**在提取溶剂中的溶解度、提取溶剂的毒性和价格、非测定成分(杂质)在提取溶剂中的分配系数等。一般选用毒性小、极性大、价格低廉的溶剂系统。常用的****提取溶剂包括甲醇、氯仿、丙酮、己烷、乙酸乙酯、乙腈和水的一种或多种不同配比的混合物。 

评价一种溶剂系统提取效果优劣的依据是回收率和提取时间,优良的溶剂系统应是**回收率高、干扰杂质少、提取时间短。如将脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxvnialenolDON)标准品添加到饲料中,用乙腈水(214,体积比)充分混合搅拌3min即可将**几乎全部提取出来,而要从天然污染的饲料中提取相当量的该**则需要16min,因此确定检测方法的回收率时应以天然污染的样品为基准。对伏马菌素(fumonisins)的研究结果显示,虽然甲醇一水(80207525,体积比)是从玉米及其制品中提取天然污染伏马菌素B1B2B3的常用溶剂,并已成为AOAC法定方法中的指定提取溶剂系统,但在振荡条件下,乙腈���水(5050,体积比)对玉米中伏马菌素的提取效果优于甲醇一水。用乙腈一甲醇一水(252550,体积比)和甲醇一水(8020、,体积比)分别提取玉米片中天然污染的伏马菌素七次,结果前者的提取效果优于后者。待测食品基质与溶剂之比是影响**回收率的又一因素。AoAC*佳食品(best foods)方法中规定分析花生中的黄曲酶**(aflatoxinsAFs)时提取溶剂(甲醇一水,5545,体积比)与样品之比为2.5:1,但实践证明该比例并非*佳,理想的配比方案应高于251,特别是分析花生粗粉中的AFs时更应增加提取液的用量。 

近来的研究表明,提取温度影响**的回收率。适当升高提取温度可增加玉米及其制品中伏马菌素的回收率。正常情况下用乙腈:水(311:1,体积比)提取伏马菌素的回收率优于甲醇:水(3141,体积比),但当温度升至80℃时,后者对玉米中伏马菌素的提取效率等同或高于前者。

 二、分离纯化 

因为样品中含有大量的蛋白质、色素、脂肪、糖和无机盐等多种物质,干扰物质在提取时也会进入提取液中,从而干扰待测**的测定。因此必须对样品提取液进行分离纯化,在确保不损失待测**的前提下除去干扰杂质,以保证测定结果的准确度。通常是将提取的有机溶剂经石油醚或正己烷处理,以除去脂质和杂质。但这一方法较为烦琐,且效果也不尽如人意。柱色谱法是*常用的净化方法,其具体方法虽因样品不同而有所差异,但其基本操作是相同的。 

根据待测物质的性质,r柱色谱净化可分别使用吸附色谱柱和分配色谱柱。常用的吸附剂有硅镁型吸附剂、氧化铝、活性炭、硅胶等,聚酰胺也可用作净化剂。常用的分配色谱固定相物质有硅藻土、纤维素等。用柱色谱净化,除使用单一的吸附剂外,也可将多种吸附剂混合使用。其方法有两种:一是分段装柱法,如用硅藻土、硅镁型吸附剂及活性炭等分段装柱净化提取液;二是混合装柱,即将各种吸附剂混合后装柱,如活性炭、氧化铝、硅藻土混合装柱净化脱氧雪腐镰刀菌烯醇的提取液。

 正相硅胶柱色谱是*****常用的净化方法。早期研究一般用长达20mm×300mm的大柱子,随着分析所需样品量减少的要求,小柱净化得到了普遍的应用。这种方法不仅节省溶剂而且大大缩短了净化时间。几种市售预处理小柱包括正相Seppak和反相Seppak柱、B(mdElute NH2Floiisil、液一液萃取柱和活性炭氧化铝柱曾被用于****提取液的净化。利用SPE(固相萃取)分离纯化****的技术已经很成熟,这一方法是将提取的有机溶剂浓缩后,过SPE柱,洗脱杂质,然后在把目标**洗脱下来进行检测。目前还发明了“**亲和柱”的分离纯化方法,所谓**亲和即是在载体上附着了目标**的抗体,利用抗原抗体反应来特异地分离目标**。

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