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超声波细胞破碎仪的常见问题及解决办法

**沉淀直接加样品1buffer,再加5ul的巯基乙醇,混匀,离心,煮沸10min,直接上样,染色脱色步 骤如下:将胶放入适量的染色液微波炉里加热1min(下次适当补点醋酸即可),将染色液换成大量的水(自来水即可)在微波炉煮10min就可以。 
在表达重组蛋白后超声波破碎细胞,采用冰浴,400w,破2s停1s,但是不一会就产生大量泡沫,影响了破碎功率,pbs和tris缓冲液都是这样,*后都是破碎不完全,而我的目的蛋白就在这些未破碎的细胞中。 
1.会产生气泡是因为你的探头位置没放好。探头一定要接近底部,约1cm(我一般是距底部0.5mm)。功率根据仪器不同会有所不同,但你可以观察液面,有波动但不要太剧烈就好。 
2.破3S停10S,破个二三十次看看。 
3.变幅杆位置摆放也要注意,听声音如果不对的话就要及时调整。另外可以从菌浓度方面考虑。在破碎时试着加大体积,强度*好不要超过60%。
4.尝试超8s停8s,对有些菌体蛋白来说,你的方法很难散热,导致蛋白变性产生气泡,*好停顿时间稍长一些,这种情况多见于包涵体形式的蛋白。 
链霉菌(放线菌)超声破碎的,用的方法条件是什么? 
前处理一般就是配置成一定浓度的菌悬液。 
使用超声破碎时采用的具体条件是: 
(1)取**的24h培养液于5000r/min下离心5min收集菌体. 
(2)用pH7.5的Na2HPO-NaH2PO缓冲液洗涤3次,再用该缓冲液将菌体配成1:3的菌悬液.置于40mL大塑料试管内。 
(3)将大塑料试管置于冰浴中,采用超声波破碎(功率200W,1/2”探头,破碎30s,间歇30S)。
(4)破碎液于12000r/min下高速冷冻离心30min,收集细胞碎片和上清夜。

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