试剂盒未提供的材料
1. 蒸馏水或去离子水
2. 可吸取50ul的移液器及吸头
3. 可吸取50ul和100ul的八道移液器及吸头
4. 吸水纸或相当的吸水材料
5. 带450nm滤光片的酶标仪
6. 计时器
7. 洗瓶
8. 20mM PBS： 0.62g NaH2PO4-2H2O+5.73gNa2HPO4-12H2O+9gNaCl 蒸馏水定容至1000ml
试验准备
干猫粮的提取方法：稀释系数：10
1）用搅拌机均质干猫粮样品。
2）称取1 g均质样品，加10 mL 20mM PBS。
3）剧烈涡旋振荡后超声裂解样品1min。再次振荡1min后静置5min。
4）10 000rpm离心10min。
5）用G6玻璃滤纸过滤清澈的上层相，然后用干净的瓶子储存提取液。
6）提取液样品可直接用于试验。
备注：如果没有玻璃滤纸可以用一次性滤器和一次性针筒过滤。
检测步骤 (注意: 标准及样品*好做平行试验以增加准确度.)
1. 将所有试剂及样品置于室温下，用实验室级的水充满洗瓶。
2. 从铝箔袋中取出相应数量的微孔条，放入干燥剂并重新封好袋子以免微孔条受潮。
3. 吸取100ul标样或稀释的样品提取液到相应的微孔。每个样品使用一个新的吸头。每孔加50ul三聚氰胺HRP酶标记物。
4. 轻轻混合60秒，孵育30分钟。
5. 孵育完后，将微孔中的溶液倒入水槽中，用洗液完全充满微孔，震荡后倒掉，重复三次，总共洗板四次。
6. 在吸水纸上拍打，尽可能将水拍干。
7. 每孔加入100ul底物溶液。
8. 孵育20分钟。
9. 每孔加入100ul终止液。
10. 用酶标仪读取450nm下的吸光值。
结果分析
1. 半定量的结果可通过样品吸光值与标样吸光值的简单对比而获得:样品的颜色比标样的颜色浅则三聚氰胺的浓度比标样的浓度高, 样品的颜色比标样的颜色深则三聚氰胺的浓度比标样的浓度低。
2. 定量分析需要绘制以标样吸光值为X轴,以标样的浓度的log值为Y轴的曲线图。画一条穿过标样点的直线，样品的吸光值位于该直线上。样品的吸光值在Y轴上的对应点为样品的浓度。如果样品吸光值大于*小标样的吸光值，则样品的浓度＜20 ppb；如果样品吸光值小于*大标样的吸光值，则样品的浓度＞500 ppb。
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提供的产品有：
甲醇：色谱纯。
乙腈：色谱纯。
氨水：含量为25％～28％。
三***。
柠檬酸。
辛烷磺酸钠：色谱纯。
三聚氰胺标准品
混合型阳离子交换固相萃取柱
微孔滤膜
高效液相色谱（HPLC）仪
分析天平
离心机
超声波水浴
固相萃取装置
氮气吹干仪
涡旋混合器
具塞塑料离心管
色谱柱：C8柱，250 mm×4.6 mm（i.d.），5 μm
C18柱，250 mm×4.6 mm（i.d.），5 μm
吡啶：优级纯。
衍生化试剂
酶标仪
三聚氰胺试剂盒
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