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PCR新手指南:PCR现在又扩增不出来了怎么办?
这个问题是常见的问题,就是一个PCR实验一直都做得很好,停一段时间后再做就不行了。一通乱找原因后还是不行,很痛苦!
找问题要从大到小:
1、PCR扩增体系问题
用其他正在进行的且扩增正常的模板和引物证明PCR扩增体系没有问题,即PCR反应混合物、水、取液器、PCR仪、操作等都是好的(阳性对照)
2、引物问题
用以前扩增产物做模板(稀释50倍),证明引物没有问题
3、只是模板问题了。
因为样本降解的可能性比引物降解的可能性高得多。也可能是样本中的抑制物过多(新鲜时没有溶出来)。
不要靠运气找问题,先做条很重要。乱找问题常常让人失去信心的。
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