DCode 突变检测系统美国伯乐Bio-rad(价格优惠）

DCode电泳系统的优点：

1．  系统提供精确的温度控制，从5-70℃，能在两个小时内运行64个样品，可以采用SSCP,TTGE,DGGE,CDGE中的任何一种技术来检测单碱基的变化。

2．  模块化设计，实验拾可灵活选择目前的需要及日后的升级。

3．  475型梯度形成仪，用于混合和传送高、低密度的溶液，产生梯度凝胶，无需蠕动泵或磁力搅拌器。

4．  有WinMelt软件，排除了引物定位的猜测性。可以预测任何达3200个碱基的DNA 熔解曲线，操作简单，界面清晰

5．  提供质控试剂盒及各种技术所需的配套试剂。

DCode能用于DGGE 技术操作，能很快检测出未知的突变体。

DGGE的原理：基于在梯度变性的条件下，双股DNA到了一定的变性条件开始部分解链，将起始解链最早的一段，去进行电泳，在凝胶片上可形成不同的分子条带，由此出鉴别DNA的突变体或野生型。

在尿素和甲酰胺缓冲液中，控温：50-65℃，变性剂的浓度呈梯度变化，这个梯度与电泳的方向或呈直角或平行。

DGGE是检测基因突变的最灵敏方法，检出率达99%。

本系统DCode之所以能做好DGGE电泳技术，因为：

1.本系统上可十分容易地做到梯度凝胶灌胶，只需采用Bio-Rad专利的梯度形成器（型号：475型梯度形成仪）

2.借软件操作，能有效地进行序列的检筛：在G-C等配对中有无变位转换，还能操作引物的设计。

3.控温组件能把温度持恒地控制在45-70℃范围内。

4.可同时操作16x16cm两张凝胶，或7.5x10cm四张。

系统功能灵活，适合多种突变检测方法
在癌症研究发展及多种单基因或多基因疾病的研究过程中，探索未知突变起着非常重要的作用。DNA 多态性是物种的生态与进化研究非常有用的工具。应用范围包括物种鉴定、种群结构分析及遗传多样性研究等。
DCode 系统由带温度控制模块（包括微处理器控制加热）的电泳设备、一个缓冲液再循环泵、一个搅拌器及铺制特殊应用凝胶的附件组成。冷却槽及一个外部实验室冷却器可把运行温度控制在室温下。一块凝胶能在2 个小时内运行64 个样品，并提供5-70℃ 范围内的精确温度控制。它可与下列的电泳技术配合使用来检测单碱基变化：
• 单链构象多态性（SSCP）
• 变性梯度凝胶电泳（DGGE）
• 时间温度梯度电泳（TTGE）
• 均一变性凝胶电泳（CDGE）
为了获得最高的通量和效率，许多实验室采用多种技术。在快节奏研究环境中，不同方法间的快速切换和转换到新技术的能力是非常关键的。DCode 系统能迎合所有主要突变检测技术的需要。其灵活的功能与优点包括：
• 温度控制选择
• 模块式设计，可满足用户现在与将来的需要
• 专用的组合配件，简化启动过程
• 针对特定技术的试剂和对照物，适合DGGE、CDGE、SSCP 和TTGE 等技术

475 型梯度形成系统能产生可靠而简便的凝胶铺制
专利设计的由凸轮操纵的人工梯度生成仪，能为DCode 系统生产线性梯度凝胶。它无需使用蠕动泵或搅拌器即可混合并传送高浓度与低浓度溶液。形成的线性梯度重复性好。

MacMelt ® 和WinMelt™ 软件优化引物置放
当突变发生于目标序列的最低熔解度区域并且DNA 分子未完全变性时，所检测到的突变最可靠。在DNA 末端添加一个GC 夹可保证待筛选区域位于较低熔解度区域，而且DNA 保持部分双链状态，这可同时提高检测和分辨率（Sheffield et al.1989）。基于Macintosh 的MacMelt 软件和基于PC Windows 的WinMelt 软件能预测最多达3,200 碱基的DNA 序列熔解图谱（Lerman 和Silverstein 1987）。通过分析引物与GC 夹的置放对DNA 熔解图谱的效应可优化这一过程。MacMelt 或WinMelt 软件推荐用于所有DGGE、CDGE 和TTGE 应用。

运用DGGE搜寻未知突变
DGGE 是基于以下原理，即增加聚丙烯酰胺凝胶内变性剂的浓度会熔解双链DNA 的不同区域。当温度达到最低熔解度区域的熔解温度(Tm) 时，DNA 部分熔解，在凝胶中形成迁移率下降的分支分子（Myers et al.1987）。在均一的运行温度（50-65℃）和尿素与甲酰胺线性变性梯度条件下即形成了变性环境。梯度以垂直或平行于电泳方向形成。DGGE 是最灵敏的突变检测方法，其效率可达99%（Grompe 1993）。DCode 系统通过以下途径优化DGGE：
• 温度控制模块提供45-70℃ 内的一致运行温度
• 系统可运行2 块16 x 16 cm 凝胶或4 块7.5 x 10 cm 凝胶
• 可选择的MacMelt 或WinMelt 软件优化了GC 夹及引物的置放

运用CDGE 快速筛选
CDGE 是高通量筛选的有效方法。CDGE 凝胶的最佳变性剂浓度由垂直梯度凝胶决定。一旦确定了特定变异的最佳变性剂浓度，便可在均一变性凝胶上筛选多个样品(Borresen et al.1991)。因此，采用CDGE 时无须使用梯度，使得快速高通量筛选变得简单。DCode 系统
提供：
• 简化的规程，用于优化变性剂浓度
• 已经优化了的电泳试剂和对照物，确保高通量筛选的出色结果
• 方便的16 x 16 cm 和16 x 10 cm 格式及无需胶带的制胶，简化并加速了工作流程

TTGE — 无需梯度凝胶却拥有DGGE 性能
TTGE 采用DGGE 的原理但不使用化学变性剂梯度，操作更简单、快速并便于重复（Yoshino et al.1991）。DNA 上样于含尿素的聚丙烯酰胺凝胶。电泳过程中逐步、均一地升高温度，从而在电泳运行过程中产生一个线性的温度梯度。变性环境由凝胶中均一的尿素浓度加上时间温度梯度形成。DCode 系统使TTGE 简化为简单而可重复的实践。
• 温度控制器与加热器可使温度缓慢地以0.1℃/hr 的速度上升
• 无需化学梯度，使设置和制胶更方便
• MacMelt 或WinMelt 软件帮助确定最佳温度范围
• 对照试剂与已证明有效的规程使你可以立即开展实验

SSCP 提供一致的结果
SSCP 因其简便性而被广泛地用于突变筛选。对一个特定样品，我们无法预测其实验条件，因此为确保最高的灵敏度，优化凝胶电泳条件（包括运行温度）显得非常重要（Orita et al.1989, Ravnik-Glavac et al.1994）。Bio-Rad 的温度控制冷却槽保证提供可重复的运行温度，以产生一致性的结果。
• 电泳冷却槽带有陶瓷冷却棒，与标准外接的再循环冷却器相连
• 控温模块带有搅拌棒、加热器和缓冲液再循环泵，维持5-25℃ 之间的均一温度
• DCode 系统也可放置在低于室温的冷库，来代替冷却槽，
• 可容纳16 x 16 cm 和16 x 20 cm 大小的凝胶，简化了银染或荧光染色的检测

Single Stranded Conformation Polymorphism (SSCP)

Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE)

Temporal Temperature Gradient Electrophoresis (TTGE)

Constant Denaturing Gel Electrophoresis (CDGE)

MacMelt and WinMelt Software Take the Guesswork Out of Primer Placement

Mutations are most reliably detected when the sequence difference occurs in the lowest melting-temperature domain of the DNA of interest. In addition, optimal resolution is attained only when the molecules do not completely denature. The addition of a GC clamp onto one end of the DNA via PCR ensures that the region screened is in a lower melting-temperature domain, and that the DNA will remain partially double-stranded. This enhances both detection and resolution. MacMelt software is Macintosh-based; WinMelt is PC Windows-based. Both predict the melting profile of any DNA sequence up to 3,200 bases. Placement of primers and GC clamps can be optimized by analysis of their effect on the DNA melting profile. Operation of MacMelt or WinMelt software is simple. First the DNA sequence is imported from a text file and the melting profile is computed. The data appear onscreen and can be graphed according to user preference. The sequences and melt data can be exported for use in other programs. MacMelt or WinMelt software is recommended for all DGGE, CDGE and TTGE applications.

Complete DCode Universal Mutation Detection Systems Offer Maximum Flexibility from the Start

The complete DCode system includes all the tools required to cast and run DGGE, CDGE, TTGE and SSCP gels. Control reagent kits for each method and the MacMelt or WinMelt software are also included.

DCode Adaptor Kits and Accessories

The DCode system offers individual adaptor kits to allow convenient custom configurations of systems to meet the changing needs of growing laboratories. A complete line of accessory combs, spacers, and glass plates is available. In addition, the MacMelt or WinMelt software and the Model 475 gradient former are offered separately.

DCode Electrophoresis and Control Reagents

Electrophoresis reagent kits customized for each application ensure that you begin with the highest quality buffers and acrylamide available. Everything required for electrophoresis is included. Our control reagents for DGGE, CDGE, TTGE and SSCP serve as learning tools to help get new techniques up and running as quickly as possible.

Comprehensive Protocols and References

Extensive bibliographies on each technique, and bulletins describing applications using the DCode system, can assist in the optimization of protocols. Request bulletin 2099 for our bibliography, or bulletin 2102 for DGGE, 2107 for CDGE, 2103 for TTGE and 2104 for SSCP.

A Note to D GENE Users

Your D GENE apparatus may be upgraded with the temperature controller that is required to set the ramp rate. Contact your Bio-Rad representative for more information. All of the DCode adaptor kits are compatible with your D GENE apparatus, with the exception of the SSCP adaptor kit. To run gels below room temperature, place the D GENE system in a cold room or refrigerator equipped with electrical outlets, and use the temperature controller to set the desired run temperature (see bulletin 1935). The Basic SSCP adaptor kit is compatible with the D GENE system, but requires use of a cold room for electrophoresis below room temperature

Data input screen.

Melting profile graph.