ELISA实验中背景深，全部呈有色可能存在的原因有一下几条

ELISA实验中，背景深，全部呈有色（通常的Elisa背景值OD<0.2）

根据技术分析，可能存在的原因有一下几条：

 

1、实验过程中洗涤不充分，洗后未拍干，样品中其它成分残留或酶标记物残留

  解决办法：洗液准确配制；充分洗涤，静置15秒，彻底拍干。加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用，不要反复使用，否则易造成污染。

 

2、底物污染，未避光保存，出现颜色

解决办法：弃去底物，重新配置

3、不正确的孵育时间，温度（尤其是底物孵育的时间）

  解决办法：zui为常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。完全按照说明书要求

 
4、样品稀释液污染

  解决办法：弃去稀释液，重新配置

 

5、吸头重复使用，未洗净或**不彻底

  解决办法：吸头尽可能一次性使用

6、偶联抗体（streptavidin-HRP）浓度过高

  解决办法：按照说明书调整到合适的浓度

 

7、ELISA板子不正确的贮存

  解决办法：酶标板贮存于2-8 ℃；使用结合力低点的Elisa板

 

8、没有正确封闭

  解决办法：在标准品稀释液中加入动物蛋白或延长封闭时间

 

9、样本溶血严重

  解决办法：建议使用非溶血或轻微溶血样本，严重溶血样本会导致背景偏高。