Bialaphos, Sodium Salt 双丙氨膦钠盐

Bialaphos, Sodium Salt 双丙氨膦钠盐

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应用案例【转基因的小麦幼胚/愈伤组织筛选】（仅作参考）：

1）   使用草铵膦（PPT）或双丙氨膦进行转化细胞的筛选；

2）   粒子轰击（bombardment）后将未成熟幼胚逐个转移到E3培养基，维持培养7-14天；

3）   胚胎转移到含5µg/ml PPT（或双丙氨膦）的MSCB5培养基（**轮筛选用培养基），黑暗培养2周；于这2周内不能正常生长的愈伤组织直接扔弃。

4）   用解剖刀将在MSCB5培养基上增殖的细胞簇解离，亚克隆，转移到含有10 µg/ml PPT（或双丙氨膦）的MSCB10培养基，维持培养4周。

5）   在含5µg/ml或10µg/ml PPT（或��丙氨膦）的培养基上筛选过程的持续周期约为50-75天。将所有培养物放到植物生长培养箱内，设置25 °C，黑暗培养。每一个转基因愈伤组织在含有筛选标志的培养基上*终生长为大量的胚性愈伤组织。

6）   设置1-10µg/ml PPT（或双丙氨膦）的梯度浓度来测试未转化愈伤组织，以建立更加有效的筛选系统。每一次实验大概准备20个目标培养平板。2个为对照，1个在N6C1上生长以监测培养物的健康情况，另1个在含5-10µg/ml双丙氨膦的N6C1上生长以验证未转化细胞对选择标志的反应。

【注意】：转基因小麦愈伤组织的选择实验中双丙氨膦是有效的筛选标志，然而双丙氨膦不能杀死未转化细胞。为了得到理想的筛选效果，建议低密度（大概每个平板上10个未成熟幼胚）亚培养粒子轰击后的细胞。

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