高效液相色谱仪测定烟用添加剂中马兜铃酸A的含量
一、原理
采用含0.1%甲酸的甲醇一水混合溶剂萃取烟用添加剂中的马兜铃酸A,经高效液相色谱仪分离,以紫外检测器测定,外标法定量。
二、试剂与材料
除特殊要求外,均使用分析纯试剂。
1、水,符合GB/T 6682中上等水的要求。
2、乙腈:色谱纯。
3、甲酸:色谱纯。
4、甲醇:色谱纯。
5、马兜铃酸A,纯度>97%。
6、甲醇水混合溶剂,体积比9:1。
7、萃取溶剂:取1mL甲酸于1000mL容量瓶中,用甲醇一水混合溶剂定容至刻度。
8、标准溶液
8.1、上等标准储备液:
称取100mg(准确至0.1mg)马兜铃酸A,用萃取溶剂溶解转移至100mL容量瓶中,定容至刻度并摇匀。在2℃~8℃下保存,有效期1个月。
8.2、二级标准储备液:
准确移取与5.0mL上等标准储备液至100mL容量瓶中,用萃取溶剂稀释定容至刻度并摇匀。在2℃~8℃下保存,有效期1个月。
8.3、标准工作溶液:
分别准确移取100uL、300uL、500uL、1000uL、2000uL、4000uL二级标准储备液至50mL容量瓶中,用萃取溶剂定容至刻度,得到系列标准工作溶液。即配即用。
三、仪器设备
1、高效液相色谱仪,配置柱温箱、梯度洗脱功能和紫外检测器。
2、分析天平,感量0.1mg。
3、振荡器,*大转速应不小于200r/min。
4、离心机,*大转速应不小于8000r/min。
5、有机相滤膜,0.45um。
四、分析步骤
1、样品处理:
称取2g(准确到0.1mg)试样于100ml。具塞锥形瓶中,准确加入50mL萃取溶剂,用150r/min振荡萃取10min。取3mL萃取液置于10mL具塞离心试管中,在5000r/min条件下离心10min,取1mL上清液过有机相滤膜,滤液用高效液相色谱仪分析。
2、色谱条件:
色谱柱:C18,3.5um,250mm(长度)×4.6mm(内径)
流动相A:0.1%的甲酸乙腈溶液(体积分数);
流动相B:0.1%的甲酸水溶液(体积分数);
柱温:35℃;
流速:1.0mL/min;
进样体积:10uL;
梯度洗脱程序见表1;
紫外检测器检测波长:393 nm。
3、样品测定:
按照仪器测试条件测定试样,每个样品平行测定两次。
4、结果的计算与表述
样品中的马兜铃酸A的含量由式(1)计算(计算结果应扣除空白值)
高效液相色谱仪测定烟用添加剂中马兜铃酸A的含量
高效液相色谱仪测定烟用添加剂中马兜铃酸A的含量
高效液相色谱仪测定烟用添加剂中马兜铃酸A的含量
高效液相色谱仪测定烟用添加剂中马兜铃酸A的含量