Hot-Start Taq DNA Polymerase

Hot-Start Taq DNA Polymerase

      Hot-Start Taq DNA Polymerase是一种仅当温度高于45℃时才具有DNA聚合酶活性的Taq DNA Polymerase(简称Taq酶)与其可逆抑制剂的混合物，俗称热启动Taq酶或HS Taq酶。使用本产品进行PCR反应时可以在室温操作，并能有效避免室温操作时由于普通Taq酶或其它耐热DNA聚合酶存在活性而导致的非特异性PCR背景。
      Hot-Start Taq DNA Polymerase是Taq酶与其可逆性抑制剂的混合物。该抑制剂可以可逆性地结合于Taq酶活性位点，当温度低于45℃时，形成非活性的Taq酶和抑制剂的复合物，从而抑制了Taq酶的活性。在常规PCR反应过程中，当温度升高至45℃或以上时，Taq酶和其可逆性抑制剂解离，从而发挥其正常的DNA聚合酶活性。上述机制使Hot-Start Taq DNA 
Polymerase仅在加热到45℃或以上时才会有酶活性，从而确保了小于45℃时不会发生非特异性的DNA聚合反应，有效降低了PCR的非特异性背景，提高了PCR反应的准确性和**性。
      常规的DNA分离纯化操作，例如PCR纯化试剂盒或DNA凝胶回收试剂盒和乙醇沉淀等操作，都能有效去除本产品中的抑制剂，以避免可能的对于后续反应的干扰。
      Hot-Start Taq DNA Polymerase使用时无需额外的高温孵育步骤以释放Taq酶活性。
      Hot-Start Taq DNA Polymerase和普通的Taq DNA Polymerase一样，可以催化5'至3'方向的依赖于DNA模板的DNA的聚合反应，没有3'至5'的外切酶活性，*终会导致PCR产物的3'末端产生3'-dA overhangs，即产生带一个A的3'粘端，可直接用于TA克隆。

       图1. Hot-Start Taq DNA Polymerase的酶活力测定。A. Hot-Start Taq DNA Polymerase (HS Taq)在40℃时，其聚合酶活力完全被抑制。以M13 mp18 ssDNA (7249nt，电泳显示约2.2kb)为模板，添加适量引物后40℃孵育10min，1% Agarose凝胶电泳。图中可见普通Taq酶在40℃可以发生聚合反应，使DNA条带延长至电泳呈现的约3.5kb大小，而Hot-Start Taq酶(HS Taq)完全不能使M13 mp18 ssDNA的链发生延长，即其酶活力完全被抑制。B. Hot-Start Taq DNA Polymerase在常规PCR条件下其活力完全被释放，PCR扩增效果和Taq酶完全一致。

      来源：本产品使用的Taq DNA Polymerase为recombinant Taq DNA Polymerase，通过大肠杆菌表达纯化获得，和纯化获得的天然Taq DNA Polymerase在各方面的性质相同。
      用途：高背景和有非特异性条带的PCR，高专一性PCR(high-specificity PCR)，高灵敏度PCR，生物芯片分析(microarray
analysis)，常规PCR，克隆PCR、TA克隆等，不建议用于荧光定量PCR (qPCR)。
      活性定义：One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribonucleotides into a
polynucleotide fraction (adsorbed on DE-81) in 30 min at 70℃. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 67 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 6.7 mM MgCl₂, 1 mM 2-mercaptoethanol, 50 mM NaCl, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml [³H]dTTP。
      纯度：不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含RNA酶，满足常规PCR反应要求。
      酶储存溶液：20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.5% (v/v) Nonidet P40, 0.5% (v/v)
Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。
      10X Hot-Start PCR Buffer：100 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25℃), 500 mM KCl, 15mM MgCl₂, 0.8% (v/v) Nonidet
P40。
      失活或抑制：酚氯仿抽提可以使Hot-Start Taq DNA Polymerase失活，加入脱氧胆酸钠至0.06%，SDS至0.01%，或
sarkosyl至0.02%均可以抑制Hot-Start Taq DNA Polymerase。
      本产品用于50微升的PCR反应体系，足够用于4000个反应；用于20微升的PCR反应体系，足够用于10000个反应。
包装清单：

保存条件：
      -20℃保存。
注意事项： 
      由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在使用Hot-Start Taq Polymerase时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
      Hot-Start Taq DNA Polymerase在PCR过程中每循环的出错几率约为2.2×10^-5，对于大于1kb的DNA片段的克隆推荐使用出错几率更低的DNA聚合酶，例如Pfu DNA Polymerase、BeyoTaq DNA Polymerase等。对于普通的PCR或RT-PCR定性检测或定量检测，Hot-Start Taq DNA Polymerase是*佳选择。
      本产品**于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或**，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的**和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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