T4 Polynucleotide Kinase

T4 Polynucleotide Kinase

      T4 Polynucleotide Kinase，简称T4 PNK，中文名称T4多聚核苷酸激酶，是一种多聚核苷酸5'羟基激酶，可以催化ATP的γ位磷酸基团向单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3'磷酸基团的单核苷酸的5'羟基转移。其他NTP也可产生相同的反应：5'-OH + NTP → 5'-P + NDP。
      上述的磷酸化反应是可逆的。当缺失ATP并且存在ADP的情况下，T4 Polynucleotide Kinase可以显示出5'磷酸酯酶的活性，催化单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3'磷酸基团的单核苷酸的5'磷酸基团向ADP的转移形成ATP。其他NTP也可产生相同的反应：5'-P + NDP → 5'-OH + NTP(*适pH为6.4左右)。
      当ATP和ADP都适量存在时，T4 Polynucleotide Kinase可以催化单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3'磷酸基团的单核苷酸的5'磷酸基团和ATP的γ位磷酸基团之间的交换反应。其他NTP也可产生相同的反应：5'-P + NTP + NDP→5'-P + NDP + NTP。
      T4 Polynucleotide Kinase同时具有3'磷酸酯酶活性，可催化3'磷酸化的多聚核苷酸的去磷酸化：3'-P → 3'-OH + Pi(*适pH为5.9左右)。
      T4 Polynucleotide Kinase的激酶活性在C-末端附近，而磷酸酯酶活性在N-末端附近。
      用途：寡核苷酸、DNA或RNA的5'末端标记，用作Southern、Northern、EMSA等的探针，凝胶电泳的marker，DNA测序引物，PCR引物等；使寡核苷酸、DNA或RNA的5'端磷酸化，确保后续连接反应顺利进行；催化3'磷酸化的单核苷酸的5'磷酸化，使该单核苷酸可以和DNA或RNA的3'末端连接；去除3'端磷酸基团。
      来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为T4嗜菌体。
      活性定义：37℃ 30分钟内，将转移ATP上1 nmol γ-磷酸基团转移到DNA 5'-OH末端所需的酶量定义为1个活性单位。
      酶活性检测条件：100mM Tris-HCl(pH8.0)，10mM MgCl₂，5mM DTT，0.5mM 5'-OH DNA，0.05mM ATP，
0.1MBq/ml [γ-³³P]-ATP。
      纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶。
      酶储存溶液：20mM Tris-HCl(pH7.5)，25mM KCl，0.1mM EDTA，2mM DTT，50% glycerol。
      Reaction Buffer A(10X)(用于磷酸化反应)：500mM Tris-HCl(pH7.6 at 25℃)，100mM MgCl₂，50mM DTT，1mM 
spermidine，1mM EDTA。
      Reaction Buffer B(10X)(用于交换反应)：500mM imidazole-HCl(pH6.4 at 25℃)，0.18M MgCl₂，50mM DTT，
1mM spermidine，1mM EDTA，1mM ADP。
      缓冲液兼容性：在的内切酶反应缓冲液1X G、1X O、1X Y、2X Y中的活性为100%，在1X B、1X R中的活性为75-100%；在的Taq、Pfu DNA polymerase和M-MuLV反应缓冲液中的活性为50-100%。
      失活或抑制：75℃加热10分钟可使T4 Polynucleotide Kinase失活，加入EDTA也可使T4 Polynucleotide Kinase失活。金属离子螯合剂、磷酸盐、铵根离子、大于50mM的KCl和NaCl均可显著抑制T4 Polynucleotide Kinase的活性。
包装清单：

保存条件：
      -20℃保存。
注意事项： 
      铵盐沉淀获得的DNA不能用于T4 Polynucleotide Kinase的标记反应。铵盐可强烈抑制T4 Polynucleotide Kinase的酶活性。
      PEG可促进磷酸化反应速率和效率；交换反应体系应加入PEG。 
      酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
      本产品**于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或**，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的**和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 

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