蛋白纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异,利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染,而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异,利用这些差异可将蛋白从混合物如大肠杆菌裂解物中提取出来得到重组蛋白。
1.不同蛋白间内在的相似性与差异
利用各种蛋白间的相似性可以除去非蛋白物质的污染,而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异,利用这些差异可将蛋白从混合物如大肠杆菌裂解物中提取出来得到重组蛋白。
2.树脂的选择
要把目的蛋白与那些大小及理化性质接近的蛋白区分开来,要用很小的树脂颗粒来提高分辨常用的离子交换柱和疏水柱,应用时要综合考虑树脂的选择性和柱效两个因素。选择性指树脂与目的蛋白结合的特异性,柱效则是指蛋白的各成分逐个从树脂上集中洗脱的能力,洗脱峰越窄,柱效越好。仅有好的选择性,洗脱峰太宽,蛋白照样不能有效分离。
蛋白的纯化大致分为粗分离阶段和精细纯化阶段二个阶段。一般蛋白纯化采用的方法为树脂法。粗分离阶段主要将目的蛋白和其他细胞成分如DNA、RNA等分开,由于此时样本体积大、成分杂,要求所用的树脂高容量、高流速、颗粒大、粒径分布宽.并可以迅速将蛋白与污染物分开,必要时可加入相应的保护剂(例如蛋白酶抑制剂),防止目的蛋白被降解。精细纯化阶段则需要更高的分辨率,此阶段是要把目的蛋白与那些分子量大小及理化性质接近的蛋白区分开来,要用更小的树脂颗粒以提高分辨率,常用离子交换柱和疏水柱,应用时要综合考虑树脂的选择性和柱效两个因素。选择性指树脂与目的蛋白结合的特异性,柱效则是指各蛋白成分逐个从树脂上集中洗脱的能力,洗脱峰越窄,柱效越好。仅有好的选择性,洗脱峰太宽,蛋白照样不能有效分离。
葡萄糖 标准品别名: D-无水葡萄糖、D(十)-无水葡萄糖、D-葡萄糖 英文名称: D(+)-Glucose CAS 编号: 50-99-7
一枝蒿庚素 标准品别名: 英文名称: Bullatine G CAS 编号: 509-24-0
**多巴 标准品别名: 英文名称: Levodopa CAS 编号: 59-92-7
棕榈酸乙酯 标准品别名: 英文名称: Palmitic acid ethyl ester CAS 编号: 628-97-7
缬草三酯 标准品别名: 缬草素、环氧戊喃 英文名称: Valtrate CAS 编号: 18296-44-1
23-羟基白桦酸 标准品别名: 英文名称: Anemosapogenin CAS 编号: 85999-40-2
芦荟苷 标准品别名: 芦荟大黄素甙、巴白洛英、坝巴甙、芦荟素A 英文名称: barbaloin CAS 编号: 1415-73-2
灯盏花甲素 标准品别名: 英文名称: apigenin-7-O-glucronide CAS 编号:
梓酚 标准品别名: 英文名称: Catalponol CAS 编号: 34168-56-4
秦皮苷 标准品别名: 白蜡树苷 英文名称: fraxin CAS 编号: 524-30-1
桑辛素 标准品别名: 英文名称: Morusin CAS 编号: 62596-29-6
远志山酮Ⅲ 标准品别名: 远志口山酮 英文名称: polygalaxanthone III CAS 编号: 162857-78-5
白杨素 标准品别名: 二羟黄酮、柯因 英文名称: Chrysin CAS 编号: 480-40-0
环氧泽泻烯 标准品别名: 英文名称: Alismoxide CAS 编号: 87701-68-6
非洲防己碱 标准品别名: 英文名称: Columbamine CAS 编号: 3621-36-1
莨菪碱 标准品别名: 天仙子碱 英文名称: L-Hyoscyamine CAS 编号: 101-31-5
阿魏酸乙酯 标准品别名: 4-羟基-3-甲氧基肉桂酸乙酯、4'-羟基-3'-甲氧基肉桂酸乙酯 英文名称: Ethyl 4'-hydroxy-3'-methoxycinnamate CAS 编号: 4046-02-0
芒柄花苷 标准品别名: 刺芒柄花素-7-葡萄糖甙;刺芒柄花苷;芒柄花素-7-O-葡萄糖苷 英文名称: Ononin CAS 编号: 486-62-4
异茴芹素 标准品别名: 异茴芹内酯 英文名称: Isopimpinellin(SH) CAS 编号: 482-27-9
雪松醇 标准品别名: 柏木脑;柏木醇;雪松脑 英文名称: Cedrol CAS 编号: 77-53-2
20(s)-人参皂苷F1 标准品别名: S型人参皂苷F1、人参皂苷 F1 英文名称: Ginsenoside F1 CAS 编号: 53963-43-2
芍药内酯苷 标准品别名: 白芍药苷;白芍苷;白花素 英文名称: Albiflorin CAS 编号: 39011-90-0
川楝素 标准品别名: 苦楝素 英文名称: Toosendanin CAS 编号: 58812-37-6
脱氢紫堇碱 标准品别名: 去氢延胡索素 英文名称: Dehydrocorydaline CAS 编号: 30045-16-0
水晶兰苷 标准品别名: 英文名称: monotropein CAS 编号: 5945-50-6
3,4,5-三咖啡酰奎宁酸 标准品别名: 英文名称: 3,4,5-Tricaffeoylquinic acid CAS 编号: 86632-03-3
α-三联噻吩 标准品别名: 英文名称: α-Terthiophene CAS 编号: 1081-34-1
二氢欧山芹素 标准品别名: 二氢山芹醇 英文名称: Columbianetin CAS 编号: 3804-70-4