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pUM19-T Vector TA克隆载体
产品描述
pUM19-T载体是一种用于PCR产物高效克隆（TA Cloning）的专用载体。它是在线性化pUC19载体的基础上，在两侧的3’端添加碱基T而制成。经特殊工艺改造后，使其具有较高的克隆效率：
1） 特殊的纯化方式使得超过99% 的pUM19载体两端都具有3’-T突出端，因此极大的降低了载体自连率。
2） 由于大部分耐热聚合酶反应时都会在PCR 产物的3’端添加一个A，可与pUM19载体3’ 端的T互补连接，因此可大大提高PCR 产物的连接和克隆效率。
3） pUM19载体多克隆位点位于β-lactamase基因内，可以通过蓝白斑快速筛选含有插入片断的重组子。
pUM19-T Vector TA克隆载体使用说明
1. 将载体置于冰上融化。建议**次使用时将载体分装成小份保存，每次取一支使用。
2. 按下表配制连接反应体系
pUM19-T Vector TA克隆载体注：插入片段与载体的摩尔比应在3:1～10:1之间。请根据琼脂糖凝胶电泳或紫外分光光度计检测确定插入片段的浓度，并根据其大小计算摩尔量。1 pmol 1 kb双链DNA的质量约为660 ng。
3. 对照反应体系（可选）：
4. 轻轻吹打混匀反应体系，室温22-26℃孵育1-2小时，或16℃过夜。
5. 转化：
1) 将连接产物加入到100 μl感受态细胞中(连接产物的体积不要超过感受态细胞体积的1/6)，轻轻弹匀，冰上孵育30分钟。
2) 将离心管置于42℃水浴，不要晃动，准确热激90s后，立刻置于冰水浴中，不要晃动，静置2-3分钟。
3) 向离心管中加入900 μl LB或SOC培养基，150 rpm, 37℃振荡培养45分钟，使菌体复苏，抗性基因表达。
4) 2500 g离心5分钟，去掉900 μl上清。用剩余培养基将菌体重悬混匀，用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀，室温正置10min。待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。
【注】：如果使用超级感受态细胞（转化效率>108 cfu/μg），可以直接吸取100-200 μl孵育后的菌液涂板。剩余菌液可在4℃保存，一周之内都可重新涂板。
pUM19-T Vector TA克隆载体运输与保存方法
冰袋运输，
pUM19-T Vector TA克隆载体注意事项
1) 尽量避免反复冻融，可将载体和对照片段分装成小份后保存。
2) 连接使用的PCR 片段3’ 端应带有A 末端；HieffTM Pfu DNA Polymerase (10113ES60/76)等高保真聚合酶的扩增产物不带A，应先在其末端加A后再进行TA克隆。
3) 为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。
附1：pUM19-T 载体结构
pUM19-T 载体结构示意图（上）以及多克隆位点序列图谱（下）
附2：pUM19-T Sequence 载体全序列（请到翊圣官网下载）
