血清专题：忽视这些？血清

血清为什么要热灭活？

一般情况下血清产品，特别是胎牛血清都是不经过灭活处理的，除非有特殊的实验要求（血清都是没有经过灭活处理呦）。

在现代科研实验中，除了**学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭**清外。对于其他大多数的细胞来说，除非文献指出该细胞必须使用灭**清，一般细胞培养可省略血清热灭活步骤。

而且很多情况下，热灭活并不会改善细胞的生长，却降低了支持细胞生长的能力。即使在少数有促进的情况下，其促进的比率也是微不足道。另外，血清的热灭活导致的沉淀常常被认为是微生物污染，从而给用户带来不必要的麻烦。

血清中沉淀是什么成分？如何预防和处理沉淀？

血清中沉淀主要有：纤维蛋白（絮状沉淀），甲胎蛋白，脂蛋白，冷凝集素，玻粘连蛋白，磷酸钙（显微镜下小黑点沉淀），胆固醇等。

原因：造成沉淀的主要原因是温度的改变。热灭活，反复冻融，长期储存于2-8℃或者室温，解冻过程中未混合等。

按如下操作可避免沉淀的产生：

 1  解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。

 2  血清分装冻存时，须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一。

 3  勿直接由-20℃直接至37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。

 4  勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。

 5  血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。

 6  若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。

目测法判断血清的质量？

目测法，我们可根据血清的颜色，沉淀，澄清度等进行区分。

颜色：颜色根据血清蛋白含量的不同，可表现出黄色或者红色。进口血清质量*好的呈现出淡黄、微红色，较差质量呈现出橘红色或鲜红色。热灭**清或保存不当的，由于血红蛋白的破坏氧化，会呈现出暗红色，甚至咖啡色。

沉淀：血清中的沉淀主要是有纤维蛋白的凝聚产生。沉淀产生的原因很多，使用时反复冻融会增加沉淀。进口血清过滤分装前很少反复冻融，因此成品清澈。

澄清度：进口血清是由于蛋白和脂类等物质含量低，表现为稀薄、清淡。国产血清绝大多数为新生牛血清，相对而言更加粘稠，颜色略深。

细胞培养中出现黑点是污染吗？如何处理？

一旦在细胞培养的过程中发现有黑点生成，首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括**污染、支原体污染等。

如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：

 1  细胞生长过老，破碎的细胞残骸;

 2  血清质量不好，反复冻融的结果;

 3  配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长;

 4  配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点;

 5  培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。

细胞培养中如何防止黑点？

 1  尽可能地减少血清冻融次数。

 2  培养基无需37℃水浴。

 3  培养基保持*佳PH值7.0~7.2。

 4  严格控制配制培养基的水质，容器定期刷洗。

 5  掌握细胞传代的*佳时机，细胞切勿生长过老。

如何更换使用血清？

需要更换使用不同品牌或批次的血清之前，需提前对要使用的血清进行验证，可使用自己经常培养的细胞进行，保证该血清对细胞生长的促进作用。在更换使用时可以将要更换的血清和原本使用的血清 1:1 混合使用 1~2 代，待细胞完全适应后进行更换。