人β-防御素2(HBD-2)人试剂盒说明书

人β-防御素2(HBD-2)人试剂盒说明书

用于测定人血清，血浆及相关液体样本中β-防御素2(HBD-2)的含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人β-防御素2(HBD-2)水平。用纯化的人β-防御素2(HBD-2) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入β-防御素2(HBD-2)，再与HRP 标记的羊抗人抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的β-防御素2(HBD-2)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人β-防御素2(HBD-2)浓度。

人β-防御素2(HBD-2)人试剂盒说明书

酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存
标准品：180 ng/L 0.5ml×1 瓶0.5ml×1 瓶2-8℃保存
标准品稀释液1.5ml×1 瓶1.5ml×1 瓶2-8℃保存
酶标试剂3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
样品稀释液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
显色剂A 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

人β-防御素2(HBD-2)人试剂盒说明书

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操作步骤
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10 孔，在**、**孔中分别加标
准品100μl，然后在**、**孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从**孔、**
孔中各取100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，
混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 弃掉，再各取50μl 分别加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各
取50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混
匀后从第七、第八孔中分别取50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准
品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，
浓度分别为120 ng/L，80 ng/L ，40 ng/L，20 ng/L，10 ng/L）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样
品*终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混
匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将30（48T 的20 倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T 的20 倍）倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。

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