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如何建耐药细胞株?
一种是脂质体转染后,单克隆筛选稳定细胞株。另外一种是应用逆转录病毒,慢病毒转染,筛选稳定细胞株。
脂质体转染:在转染24小时后,消化细胞并计数。将细胞种到96孔板,保证每个孔2-3个细胞,这样才能得到单克隆。待细胞贴壁后,加入抗生素筛选。筛选时间和浓度视细胞而定。一般G418一个星期作用,嘌呤霉素2-3天。
脂质体法筛单克隆时间较长,且效率低,大概只有1%。
病毒转染:先要用包装细胞,一般为293细胞,包装出病毒,再用病毒转染目的细胞。包装病毒视不同类型的病毒而定,一般要3-5天的时间。包装好的病毒要测滴度,根据滴度决定转染目的细胞的病毒量。转染目的细胞1-2天后加抗生素筛选得到稳定细胞株。
病毒转染得到稳定细胞株的效率高,只是步骤繁琐。
现在很多家公司提供构建稳定细胞株的技术服务,如杭州的波因,南京的凯基等,可以提供各种载体的构建及细胞株的构建整套技术服务
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