**组化SP法实验步骤有哪些

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点击量: 176956 来源: 上海市拜沃生物科技有限公司

**组化SP(streptavidin-perosidase)法相信很多人都不陌生,其又称之为链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法,下面我们对其进行详细的介绍希望能帮助到大家。

按标记物质的种类,如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等,可分为**荧光法、放射**法、酶标法和**金银法等。按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法);按结合方式可分为抗原—抗体结合,如过氧化物酶-抗过氧化物酶(PAP)法和亲和连接,如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法等,其中**组化SP法是*常使用的方法。

一般的**组化sp法的实验步骤具体如下:

1、烤片,68℃,20分钟,

2、常规二甲苯脱蜡,梯度酒精脱水;二甲苯I 20min --二甲苯II 20 min--100%酒精I 10min --100%II 10min --95% 5min-- 80% 5min-- 70% 5min

3、阻断 灭活内源性过氧化物酶:3%H2O2 37℃孵育10minPBS冲洗3X5min

4、抗原修复:0.01M枸橼酸缓冲液(PH 6.0)中用煮沸(95℃,1520min),自然冷却20min 以上,再用冷水冲洗缸子,加快冷却至室温,PBS冲洗3X5min

5、正常羊血清工作液封闭,3710 min,倾去勿洗.

6、滴加一抗4 冰箱孵育过夜,PBS冲洗3X5min(用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照);

滴加生物素标记二抗, 37℃孵育30min, PBS冲洗3X5min;

7、滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液,37℃孵育30min, PBS冲洗3X5min;

8DAB/ H2O2反应染色,自来水充分冲洗后,苏木素复染,常规脱水,透明,干燥,封片。

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