人溶酶体相关膜蛋白2 (HLAMP2)酶联** elisa试剂盒货号EIA184

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产品型号：货号EIA184

品牌：其它品牌

公司名称：上海经科化学科技有限公司

所在地：上海闵行

发布时间：2018-09-04

浏览次数：353 次

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产品简介

本试剂仅供科研使用！
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产品详细信息

本试剂盒仅供研究使用

人溶酶体相关膜蛋白2 (HLAMP2)酶联** elisa试剂盒的实验原理

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗 HLAMP2抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗 HLAMP2抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的 HLAMP2呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人溶酶体相关膜蛋白2 (HLAMP2)酶联** elisa试剂盒组成及试剂配制

1. 酶联板(Assay plaHLAMP2 )：一块（96孔）。

2. 标准品（Standard）： 2瓶(冻干品)。

3. 样品稀释液(Sample Diluent)： 1×20ml/瓶。

4. 生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）： 1×10ml/瓶。

5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent） 1×10ml/瓶。

6. 生物素标记抗体（Biotin-antibody）： 1×120μl/瓶（1：100）。

7. 辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）： 1×120μl/瓶（1：100）。

8. 底物溶液（TMB SubstraHLAMP2）： 1×10ml/瓶。

9. 浓洗涤液（Wash Buffer） 1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10. 终止液（Stop Solution）： 1×10ml/瓶。

人溶酶体相关膜蛋白2 (HLAMP2)酶联** elisa试剂盒需要而未提供的试剂和器材

1. 标准规格酶标仪

2. 高速离心机

3. 电热恒温培养箱

4. 干净的试管和Eppendof管

5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，*好用多通道移液器

6. 蒸馏水，容量瓶等

标本的采集及保存

1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可立即检测；或进行分装，并将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。解冻后的样品应再次离心，然后检测。

2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000 g离心15分钟，取上清即可立即检测；或进行分装，并将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。解冻后的样品应再次离心，然后检测。

3. 细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可立即检测；或进行分装，并将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。解冻后的样品应再次离心，然后检测。

注：标本溶血会影响*后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

标本的稀释原则：

首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。*后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。

标准品的稀释原则：2瓶，使用前于6000-10000rpm离心30秒。每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为10 ng/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释10 ng/ml, 5 ng/ml, 2.5 ng/ml, 1.25ng/ml, 0.62 ng/ml, 0.32ng/ml, 0.16 ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml，临用前15分钟内配制，用完丢弃，下次检测使用新鲜配置的标准品。

如配制5 ng/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）10 ng/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

生物素标记抗体的稀释原则：

打开瓶盖前请离心，收集瓶壁上的溶液。临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：

打开瓶盖前请离心，收集瓶壁上的溶液。临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

人溶酶体相关膜蛋白2 (HLAMP2)酶联** elisa试剂盒操作步骤

实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。加样时，枪头应直接对准液面，切勿沿孔壁加样。

1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。

为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。

3. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，200μl/每孔，甩干。

4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液） 100μl，37℃，60分钟。

5. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，200μl/每孔，甩干。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔显色不明显，即可终止）。

7. 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后15分钟以内进行检测。

实验备注